【MDA丙二醛檢測】抗氧化活性評估-硫代巴比妥酸（2-thiobarbituric acid，TBA）檢測法
常見抗氧化活性的評估-硫代巴比妥酸（2-thiobarbituric acid，TBA）檢測法
脂質過氧化檢測試劑盒 Lipid Peroxidation (MDA) Assay Kit
人體在正常代謝過程中會產生自由基（free radical）與活性氧，抗氧化劑(Antioxidants)在防止自由基（free radical）和其它潛在毒性氧化物質的形成和清除中，扮演重要角色。抗氧化物質三大種類: 抗氧化維生素系統&小分子、抗氧化酵素系統、和蛋白質。抗氧化維生素系統&小分子包括抗壞血酸鹽(ascorbate)，尿酸(uric acid)、GSH、維生素E(Vitamin E, tocopherol -生育酚）、類胡蘿蔔素（β-carotene）、輔酶Q10等。抗氧化酵素系統包括GSH還原酶(GSH reductase)、過氧化氫酶(catalase)、過氧化物酶(peroxidase）等。蛋白質包括（白蛋白albumin)、transferrin(轉鐵蛋白等）等。抗氧化物（antioxidants）之作用是指能有效抑制或減緩自由基或自由基所產生之氧化鏈鎖反應之物質。在人體內有兩大抗氧化系統，一是抗氧化維生素系統，另一則是抗氧化酵素系統。目前常用於分析抗氧化活性的方法很多，包括清除xanthine / xanthine oxidase所產生之超氧陰離子（superoxide anion radical，O2- ）的作用、捕捉過氧化氫（H2O2）的能力測定、還原力測定、清除DPPH（α,α-diphenylβ-pricrylhydrazyl）自由基能力測定、硫代巴比妥酸（TBA）法和生物化學發光法清除氧自由基能力評估等。
氧化應激(Oxidative stress)與包括心血管疾病(chronic diseases)在內的許多慢性疾病的病因有關。 脂質過氧化(Lipid peroxidation)是由於氧化損傷(oxidative damage)而發生的脂質(lipids)降解(degradation)，是氧化應激(oxidative stress)的有用標記(useful marker)。 多不飽和脂質(Polyunsaturated lipids)通常易受活性氧(reactive oxygen)的影響而受到氧化攻擊，從而導致產生明確的鏈反應，並生成最終產物，如丙二醛（malondialdehyde ,MDA）脂質過氧化(Lipid peroxidation)可能導致許多疾病的病理，包括動脈粥樣硬化(atherosclerosis)，糖尿病(diabetes)和阿爾茨海默氏病(Alzheimer’s)。硫代巴比妥酸（thiobarbituric acid ,TBA）法是測量脂肪酸，細胞膜和生物組織脂質過氧化的最古老也是應用最多的方法。CheKine™脂質過氧化（CheKine™ Lipid Peroxidation (MDA) Assay Kit, MDA）檢測試劑盒為檢測各種樣品中存在的丙二醛（malondialdehyde, MDA）提供了便利的工具。 MDA與4-羥基壬烯醛（4-hydroxynonenal , 4-HNE）一起是脂質過氧化(lipid peroxidation)作用的天然副產物，其定量通常用作脂質過氧化(lipid peroxidation)作用的標記。 樣品中的MDA與硫代巴比妥酸（thiobarbituric acid ,TBA）反應生成MDA-TBA加合物，可以很容易地在OD 532 nm處進行比色定量。 同時，測量600nm處的吸光度，並通過532nm和600nm處的吸光度之差計算MDA（以避免蔗糖(saccharose) 的干擾）。1-100 µM/L
脂質過氧化產品
脂質過氧化或氧與不飽和脂質的反應產生多種氧化產物。脂質過氧化的主要產物是脂質氫過氧化物（LOOH）。在脂質過氧化過程中可以作為次級產物形成的許多不同醛類中，丙二醛(MDA)、丙醛、己醛和4-羥基壬烯醛(4-HNE) 已被Esterbauer 和他的同事在80 年代進行了廣泛研究[38 – 49 ] ]。MDA 似乎是脂質過氧化最具致突變性的產物，而 4-HNE 是毒性最強的[ 50 ]。由於 MDA 容易與硫代巴比妥酸 (TBA) 發生反應，多年來，MDA 已被廣泛用作 omega-3 和 omega-6 脂肪酸脂質過氧化的便捷生物標記 [48 , 51 ]。TBA 測試基於 TBA 與 MDA 的反應性，產生強烈色彩的髮色團螢光紅色加合物；此測試首先由食品化學家用來評估脂肪和油的自動氧化降解[ 52 ]。然而，眾所周知，硫代巴比妥酸反應物質測試 (TBARS) 缺乏特異性，這導致其用於體內樣本中 MDA 定量的重大爭議。一些用於測定遊離和總 MDA 的技術，例如氣相色譜-質譜 (GC-MS/MS)、液相層析-質譜 (LC-MS/MS) 以及幾種基於衍生化的策略，已在過去十年[ 53 ]。因為 MDA 是確定臨床情況中氧化壓力的最流行和最可靠的標記物之一[ 53 ]，並且由於 MDA 的高反應性和毒性，該分子與生物醫學研究界非常相關。文獻引用 doi: 10.1155/2014/360438
次級脂質過氧化產物：MDA
MDA 是花生四烯酸和較大的 PUFA [ 49 ] 透過酵素或非酵素過程分解而產生的最終產物（圖3）。透過酶促過程產生MDA 是眾所周知的，但其生物學功能及其可能的劑量依賴性雙重作用尚未得到研究，儘管MDA 比ROS 更化學穩定且具有膜滲透性，並且比4-HNE 和甲基乙二醛(MG) 毒性較低[ 49 ]。迄今為止，只有少數論文報導MDA可能充當信號信使並調節基因表現：（i）最近的研究表明MDA主要透過Wnt途徑充當信號信使並調節胰島葡萄糖刺激的胰島素分泌（GSIS）。中等高的MDA水準（5和10μM ）促進胰島GSIS，升高ATP/ADP比值和胞質Ca 2+水平，並影響GSIS關鍵調節因子的基因表現和蛋白質/活性產生[ 73 ]；(ii) 在肝星狀細胞中，MDA 透過上調特異性蛋白 1 ( Sp1 ) 基因表現以及 Sp1 和 Sp3 蛋白量來誘導膠原蛋白基因表現[ 74 ]。Sp1和Sp3都可以與轉錄起始複合物、組蛋白修飾酶和染色質重塑複合物等大量蛋白質相互作用並招募大量蛋白質，這強烈表明Sp1和Sp3是染色質重塑和基因表達調控中的重要轉錄因子[ 75 ]。另一方面，儘管非酶促過程具有潛在的治療價值，但人們對MDA 的產生仍知之甚少，因為這種MDA 被認為是在壓力條件下產生的，並且具有與多種生物分子（例如蛋白質或DNA）反應的高能力，從而導致加合物的形成[ 76 – 78 ]，過量的 MDA 產生與不同的病理狀態有關 [ 79 – 85 ]（參見表格1）。正如關於該化合物的大量文獻所表明的那樣，識別體內MDA 的產生及其在生物學中的作用非常重要（2013 年12 月，PubMed 資料庫中超過15,800 篇文章使用關鍵字「丙二醛脂質過氧化”）。文獻引用 doi: 10.1155/2014/360438
活細胞和死細胞雙染色套組 | CCK-8細胞增殖和細胞毒性試劑盒 | LDH細胞毒性測定試劑盒 | 細胞衰老檢測試劑盒（β-半乳糖苷酶 | 細胞增殖EdU Image試劑盒
(文獻引用出自)
(文獻引用出自)
(文獻引用出自) Fig. 3. Effects of CS exposure on the expression of ferroptosis regulators in the placenta. (A) qPCR analysis of ferroptosis regulators mRNA levels in the placenta. (B) Ferroptosis regulators protein expression. (C) MDA level in the placenta. *p < 0.05 vs. CON; (n = 5–8).
(文獻引用出自 ) To assess the effect of Cd exposure on the oxidative state, the activity of catalase (CAT), malondialdehyde (MDA), and total antioxidant capacity (TAC) in MC3T3-E1 cells was detected using the commercial kit (Abbkine, China).
Fig. Typical MDA standard calibration curve. The y-axis is ΔOD and the x-axis is MDA concentration (uM).
| Product name | CheKine™ Micro Lipid Peroxidation (MDA) Assay kit |
| Kit components | • Extraction Buffer • Reaction Mix |
| Features & Benefits | • Determination of MDA in serum, plasma, urine, animal and plant tissues, cells, bacteria and other biological fluids. • Fast and convenient, measuring lipid peroxidation in a wide range of samples. |
| Usage notes | • If not assayed immediately, samples can be stored at -80°C. |
| Storage instructions | Kit has a storage time of 6 months from receipt. Refer to list of materials supplied for storage conditions of individual components. |
| Shipping | Gel pack with blue ice. |
| Background | Oxygen free radicals react on lipid unsaturated fatty acids to produce lipid peroxidation. The latter gradually breaks down into a series of complex compounds, including malondialdehyde (MDA). Lipid oxidation levels can be measured by detecting MDA levels. Lipid peroxidation may contribute to many diseases, including atherosclerosis, diabetes, and Alzheimer’s disease. CheKine™ Micro Lipid Peroxidation (MDA) Assay kit provides a convenient tool for detection of the malondialdehyde (MDA) |
Storage at -20°C immediately upon receipt. Kit has a storage time of 6 months from receipt. Refer to list of materials supplied for storage conditions of individual components.
常見抗氧化活性的評估方法
Abbkine所有生化試劑盒都可用分光光度計檢測的，需確認一個先決條件：具備與分光光度計匹配的微量比色皿。
| 分類 | 貨號 | 品項 | 內容 | 更多資料 |
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常見抗氧化活性的評估方法 <抗氧化維生素系統&小分子> |
貨號KTB1070 | CheKine™黃嘌呤氧化酶檢測 |
CheKine™ Xanthine Oxidase Assay Kit 線性範圍15.6 -500 mU/mL |
操作手冊 |
| 貨號KTB1910 | CheKine™活性氧（ROS）檢測分析試劑盒 <螢光檢測> |
活性氧ROS檢測 DCFH-DA (10 mM) |
操作手冊 | |
| 貨號KTB1400 | 一氧化氮（NO）檢測 | 一氧化氮（NO）檢測範圍：1-100 µM | 操作手冊 | |
| 貨號KTB1040 | Catalase過氧化氫酶/觸酶活性檢測 | 測量線性範圍為 2-75 µM, 最低測量活性為2 U/ml。 | 操作手冊 | |
| 貨號KTB1500 | 總抗氧化劑能力分析 | 偵測範圍: 0.15-3 mM | 操作手冊 | |
| 貨號KTB1530 |
<植物> |
偵測範圍:0.156-10 mg/g | 操作手冊 | |
| 貨號KTB1050 | CheKine™脂質過氧化檢測試劑盒 | MDA與硫代巴比妥酸（thiobarbituric acid ,TBA）反應生成MDA-TBA加合物在OD 532 nm處進行比色定量。1-100 µM/L | 操作手冊 | |
| 貨號KTB1091 | 羥基自由基清除能力比色測定試劑盒 | Hydroxyl Free Radical Scavenging Capacity Colorimetric Assay Kit | 操作手冊 | |
| 貨號KTB1210 | 超氧陰離子比色測定試劑盒 | Superoxide Anion Colorimetric Assay Kit | 操作手冊 | |
| 貨號KTB1020 |
<組織/細胞> |
NAD是一種酶共體(enzymatic cofactor)，涉及許多氧化還原反應(redox reactions) | 操作手冊 | |
| 貨號KTB1041 | CheKine™ 過氧化氫 (H2O2) 檢測試劑盒 | 過氧化氫 (Hydrogen Peroxide , H2O2) 是一種活性氧(reactive oxygen)代謝副產物 | 操作手冊 | |
| 貨號KTB1080 | 超氧陰離子清除測定試劑盒| | O2-與四唑鎓鹽WST-8染料反應形成水溶性的有色formazan產物 | 操作手冊 | |
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常見抗氧化活性的評估方法 <抗氧化酵素系統> |
貨號KTB1610 |
英文名稱: CheKine™ Glutathione Oxidized (GSSG) Colorimetric Assay Kit |
穀胱甘肽氧化（GSSG）比色分析試劑盒：還原型穀胱甘肽可與DTNB反應並生成2-硝基-5-巰基苯甲酸，在412nm波長處具有最大的光吸收率。 | 操作手冊 |
| 貨號KTB1600 | 英文名稱: CheKine™ Reduced Glutathione (GSH) Colorimetric Assay Kit 還原型穀胱甘肽（GSH）檢測 |
利用DTNB與還原型穀胱甘肽反應形成黃色產物。在412 nm處測得的光密度可以直接反映樣品中的穀胱甘肽濃度。 | 操作手冊 | |
| 貨號 KTB1620 | 英文名稱: CheKine™ Glutathione Oxidized (GSSG) Colorimetric Assay Kit 氧化型穀胱甘肽（GSSG）檢測 |
還原型穀胱甘肽可與DTNB反應並生成2-硝基-5-巰基苯甲酸，在412nm波長處具有最大的光吸收率。10-20uM | 操作手冊 | |
| 貨號KTB1640 |
英文名稱: CheKine™ Glutathione Peroxidase (GSH-Px) Colorimetric Assay Kit
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GSH-Px催化H2O2氧化GSH生成GSSG；穀胱甘肽還原酶（GR）催化NADPH還原GSSG從而再生GSH，而NADPH氧化產生NADP +。 NADPH在340 nm處有一個特徵吸收峰，而NADP +沒有。通過測量340 nm處吸光度的降低速率來確定NADPH脫氫速率，以計算GSH-Px活性。 | 操作手冊 | |
| 貨號KTB1630 |
英文名稱: CheKine™ Glutathione S-Transferase (GST) Colorimetric Assay Kit |
FGST催化GSH與CDNB的結合。共軛伴隨著在340nm處吸光度的增加。增加速率與樣品中的GST活性成正比。 | 操作手冊 | |
| 貨號KTB1650 |
英文名稱: CheKine™ Thioredoxin Reductase (TrxR) Colorimetric Assay Kit |
TrxR可以催化NADPH還原DTNB從而生成TNB和NADP +。 TNB在412nm處具有特徵吸收峰。 TrxR活性可以通過測量412 nm處TNB的增加速率來計算。 | 操作手冊 | |
| 貨號KTB1660 |
英文名稱: CheKine™ Thioredoxin Peroxidase (TPX) Colorimetric Assay Kit |
TPX催化H2O2氧化二硫蘇糖醇（DTT）。 H2O2的吸收波長為240nm。 TPX活性可以通過測量240nm處吸光度的降低速率並減去過氧化氫酶（CAT）催化的H2O2來計算。因此，該試劑盒可以同時測量樣品的TPX和CAT活性。 | 操作手冊 | |
| 貨號KTB1030 | WST-8法測定SOD活性，最大抑制率可接近100%，不受一些常見干擾因素的干擾。廣泛的線性範圍：3.13-200U/mL。 | 操作手冊 | ||
| 貨號CEA660Ge | 8-羥基去氧鳥苷(8-OHdG)檢測試劑盒(酵素免疫分析法 | 偵測的靈敏度74.07-6000pg/mL、最低靈敏度27.53pg/mL | 操作手冊 | |
| 貨號KTB1011 | CheKine™ 葡萄糖-6-磷酸脫氫酶 (G6PDH) 活性比色測定試劑盒 | 貨號KTB1011 | 樣品中存在的 G6PDH 將 NADP+ 轉化為 NADPH，其在 340 nm 處具有吸光度。 | 操作手冊 | |
| 貨號KTB1140 |
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Polyphenol Oxidase (PPO) Activity Colorimetric Assay Kit | 操作手冊 | |
| 常見抗氧化活性的評估方法 <蛋白質> |
貨號KTB1200 | CheKine™蛋白羰基比色測定試劑盒 | 貨號KTB1200 | 羰基蛋白(Protein carbonyl)是蛋白質氧化修飾(protein oxidative modification)過程中早期信號，是衡量蛋白質氧化損傷(protein oxidative damage)的主要指標 | 操作手冊 |