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【β-肌動蛋白(β-actin)、GAPDH ( GAPDH)和 β-微管蛋白( β-tubulin)抗體套組】ABBKINE貨號 KTD101-EN

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WB內參抗體對照(Loading control )操作手冊

特點

【β-肌動蛋白(β-actin)、GAPDH ( GAPDH)和 β-微管蛋白( β-tubulin)抗體套組】ABBKINE貨號 KTD101-EN

WB experiments眾所周知,內參蛋白(internal reference protein)在大多數組織和細胞中都具有高且穩定的表達,這是表明每個孔中的樣品具有相同蛋白載量(the same protein load)的重要參考。內部參考抗體(Internal reference antibodies)還可以指示蛋白質印跡(western blotting)過程中轉移膜(transfer membrane)的效率。​​通過內參對照可以確保所有樣本的上樣量一致,繼而能夠對目的蛋白進行標準化分析。因此,內參蛋白在不同樣本中的表達量應相對穩定。Abbkine 提供一整套單克隆(monoclonal)、多克隆參考抗體(polyclonal reference antibodies)和參考雞尾酒套裝(reference cocktail sets),具有高特異性和廣泛的應用類型,可滿足您大部分蛋白質定性、定量和定位分析的需求。除了常見的人(human)、鼠(mouse)、大鼠抗體(rat antibodies)外,我們還提供更多其他物種的內參抗體(internal reference antibodies),以及大包定制服務。雞尾酒套裝(reference cocktail sets)一組含有三種參考抗體(polyclonal reference antibodies)。

Internal reference antibody

內參抗體(internal reference antibody)種類繁多,因此選擇合適的內參抗體非常重要!考慮樣本物種(Consider sample species)。對於哺乳動物組織和細胞,常用的內參蛋白有β-actin、Tubulin、GAPDH、Lamin B1、PCNA、Na+/K+-ATPase等。對於植物樣品,常用Plant actin和Rubisco。考慮目標蛋白的分子量(Consider the molecular weight of the target protein)。選擇的參考蛋白應具有與目標蛋白不同的分子量 (>5 KDa),以便區分目標蛋白條帶。對於高分子量蛋白質(超過 100 kDa),建議將 Vinculin 作為內部參考。考慮目的蛋白的表達和定位(Consider the expression and location of the target protein),選擇相應的內參,如全細胞(whole cell)、細胞核(nucleus)、線粒體(mitochondria)、細胞膜(cell membrane)等。應考慮在某些條件下內參蛋白的異常表達。

β-肌動蛋白單株抗體 | Anti-GAPDH單株抗體 | 

Universal Reference Antibody Cocktail Set 提供了一種全面而細緻的方法,用於快速方便地測定各種樣品中的參考蛋白含量。經典的 GAPDH、β-actin 和 β-tubulin 是被引用數百篇文獻的三種最常用的內參抗體,可用於人類、小鼠、大鼠和其他常見物種的樣本,並且廣泛用於不同樣品類型和分子量大小的內參。

WB內參抗體對照Universal Loading Control Antibody Cocktail貨號 KTD101-EN

產品介紹:

Universal Internal Reference Antibody Cocktail 是一套包含常用的抗體 β-肌動蛋白(β-actin)、GAPDH ( GAPDH)和 β-微管蛋白( β-tubulin)三種抗體之套組,可應用於免疫測定中(如WB、IHC-P、IF實驗),且包括有抗體稀釋劑(SuperKine™ Enhanced Antibody Diluention Buffer)及WB Positive Control。套組內的商品都可單買。

內參抗體有很多種。因此,選擇合適的內參抗體應遵循以下三個原則:

1.從樣本種類來看,對於哺乳動物組織和細胞,常用的內參蛋白有β-actin、Tubulin、GAPDH、Lamin B1、PCNA、Na+ /K+-ATPase等。對於植物樣品,常用Plant Actin和RuBisCo。考慮目的蛋白的分子量。

2. 選用的參考蛋白應與目的蛋白具有不同的分子量(>5 kDa),以區分目的蛋白條帶。對於高分子量蛋白質(大於100 kDa),我們建議客戶使用Vinculin作為內參;

3. 考慮目的蛋白的表達和定位,選擇相應的內參,如全細胞、細胞核、線粒體、細胞膜等。

操作手冊

  • Anti-β-Actin Mouse Monoclonal Antibody (1C7)-60 μL*1 Tube
  • Anti-GAPDH Mouse Monoclonal Antibody (2B5)-60 μL*1 Tube
  • Anti-β-Tubulin Mouse Monoclonal Antibody (3G6)-60 μL*1 Tube
  • WB Positive Control-100 μL*1 Tube
  • SuperKine™ Enhanced Antibody Diluention Buffer-50 mL*2 Bottle

WB陽性對照樣品在本試劑盒中的作用是什麼?陽性對照裂解物用於證明實驗是有效和正確的,證明目標蛋白在樣品中沒有表達。在設置新實驗時,我們強烈建議使用陽性對照裂解物,這將提高實驗的可靠性。

Fig.1. WB experiment of β-Actin expression, the samples are Rat brain (lane 1), HeLa cell lysate (lane 2), Mouse brain (lane 3) each 10 ug, the primary antibody is β-Actin mouse monoclonal antibody ( 1C7) (A01010, 1:5000), the secondary antibody is goat anti-mouse IgG (A21010, 1: 10000).

Fig.1. WB experiment of β-Actin expression, the samples are Rat brain (lane 1), HeLa cell lysate (lane 2), Mouse brain (lane 3) each 10 ug, the primary antibody is β-Actin mouse monoclonal antibody ( 1C7) (A01010, 1:5000), the secondary antibody is goat anti-mouse IgG (A21010, 1: 10000).

Fig.2. WB experiment of GAPDH, the samples are Hela (lane 1), rat brain (lane 2), Mouse brain (lane 5) each 10 ug, the primary antibody is GAPDH mouse monoclonal antibody (2B5) (A01020, 1 : 10000), the secondary antibody is goat anti-mouse IgG (A21010, 1: 10000).

Fig.2. WB experiment of GAPDH, the samples are Hela (lane 1), rat brain (lane 2), Mouse brain (lane 5) each 10 ug, the primary antibody is GAPDH mouse monoclonal antibody (2B5) (A01020, 1 : 10000), the secondary antibody is goat anti-mouse IgG (A21010, 1: 10000).

Fig.3. WB experiment of β-Tubulin, the samples are Rat brain (lane 1), A549 cell (lane 2), Mouse brain (lane 3) each 10 ug, the primary antibody is β-Tubulin mouse monoclonal antibody (2B5) (A01030, 1:10000), the secondary antibody is goat anti-mouse IgG (A21010, 1:10000).

 

Fig.3. WB experiment of β-Tubulin, the samples are Rat brain (lane 1), A549 cell (lane 2), Mouse brain (lane 3) each 10 ug, the primary antibody is β-Tubulin mouse monoclonal antibody (2B5) (A01030, 1:10000), the secondary antibody is goat anti-mouse IgG (A21010, 1:10000).

Product name 建議濃度 Product NO. Size
Universal Loading Control Antibody Cocktail KTD101-EN 1 Kit
Anti-β-Actin Mouse Monoclonal Antibody (1C7) WB (1:10000), IHC-P (1:400), IF (1:100-1:400). ABL1010 50 uL/200 uL/200 uL *5
Anti-GAPDH Mouse Monoclonal Antibody (2B5)  WB (1:10000), IHC-P (1:400), IF (1:400). ABL1020 50 uL/200 uL/200 uL *5
Anti-β-Tubulin Mouse Monoclonal Antibody (3G6) WB (1:10000), IHC-P (1:400), IF (1:400). ABL1030 50 uL/200 uL/200 uL *5
SuperKine™ Enhanced Antibody Dilution Buffer BMU103-EN 100 mL /500 mL

The components in the set (A01020, A01010, A01030, BMU103-EN) can also be ordered separately.

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