SIRT1 活性檢測試劑盒 | Abcam 貨號(ab156065)

SIRT1 Activity Assay Kit (Fluorometric) (ab156065)

組蛋白去乙醯化酶 (Histone Deacetylases, HDAC) 是一類負責核心組蛋白（H2A、H2B、H3 和 H4）N 端部分賴氨酸殘基去乙醯化的酶，使組蛋白能夠更緊密地包裹 DNA。根據功能和 DNA 序列相似性，HDAC 蛋白分為四類 (class I, class IIA, class IIB, class III, class IV)。I、IIA 和 IIB 類被認為是「經典」HDAC，其活性受到曲古抑菌素 A (trichostatin A, TSA) 的抑制，而 III 類是不受 TSA 影響的 NAD+ 依賴性蛋白 (sirtuins) 家族。僅基於與其他類別的 DNA 序列相似性，IV 類本身就被認為是非典型類別。SIRT1 活性檢測試劑盒（螢光法）(ab156065) 可檢測裂解物中的 SIRT1 活性(SIRT1 activity)。

SIRT1 是一種保守蛋白，最近被證明可以調節芽殖酵母( budding yeast)和線蟲(nematode)的壽命延長。 2000年，有報告指出酵母SIRT1蛋白是一種NAD(+)依賴性組蛋白去乙醯化酶，在轉錄沉默、基因組穩定性和壽命中發揮關鍵作用。 Sir2 的人類同源物 SIRT1 也具有 NAD(+) 依賴性 p53 去乙醯化酶和 NAD(+) 依賴性組蛋白去乙醯化酶的功能。 SIRT1 可調節 p53 腫瘤抑制因子的活性並抑制細胞凋亡。這些結果對於 SIRT1 在調節 p53 依賴性細胞凋亡反應中細胞敏感性的重要作用以及癌症治療中的可能效果具有重要意義。由於透過與DNA損傷試劑一起使用使p53的功能強力增強，因此SIRT1抑制劑有望成為有效的抗癌藥物。然而，測量SIRT1活性的常規方法非常複雜且費力。為了測量SIRT1酶活性，需要製備放射性乙醯化組蛋白作為底物。首先，必須透過在培養基中添加放射性乙酸來用放射性代謝標記細胞。其次，必須從細胞純化放射性乙醯化組蛋白。反應後，需要提取並分離乙醯化組蛋白中釋放的放射性乙醯基，使用乙酸乙酯根據放射性測量酶的活性。儘管近年來報導了不使用放射性物質測量去乙醯酶活性的方法，但由於使用螢光標記的乙醯化賴氨酸作為底物，必須將反應產物與完整的底物分離並測量螢光強度以反相HPLC 。如上所述，這些測量系統由於操作複雜而難以適應在各種條件下處理許多樣品。因此，優選用於生化分析以及不使用放射性物質的抑制劑篩選的簡單系統。

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SIRT1 活性檢測試劑盒(SIRT1 Activity Assay Kit)主要設計用於使用粗 SIRT1 級分(crude SIRT1 fraction)或純化的 SIRT1 快速、靈敏地評估 SIRT1 抑制劑或活化劑。此外，如果使用適當的針對 SIRT1 的抗體（抗 SIRT1 抗體 (ab7343)）進行免疫沉澱，則可以使用 SIRT1 活性測定試劑盒測定任何培養的原代細胞、細胞系或組織勻漿的 SIRT1 活性。Abcam 的 SIRT1 活性檢測試劑盒（螢光法）已被證明可以檢測 Sirtuins 的活性，至少可以檢測人類或動物細胞裂解物或柱級分中的 SIRT1。此測定顯示樣品反應具有良好的線性。此測定可用於追蹤Sirtuins的純化或可用於檢測細胞裂解物中Sirtuins的存在。

1. 監測SIRT1的純化情況。

2.篩選SIRT1的抑制劑或活化劑。

3.檢測藥物對SIRT1的影響。

功能研究 – SIRT1 活性檢測試劑盒（螢光測定）(ab156065)

C2C12 和 L6 成肌細胞分別以 1 和 2 µM KL1333 處理 1 小時。使用基於螢光的測定法分析了兩種細胞系中的 SIRT1 活性。

Seo、Kang-Sik 等人，神經病學前沿？卷。9 552.，圖2，doi：10.3389/fneur.2018.00552

功能研究 – SIRT1 活性檢測試劑盒（螢光測定）(ab156065)

僅在載體對照和 NAM 條件下，使用 46 個實驗組的 9 組細胞的代表性樣本檢測第 21 天的 SIRT1 酶活性

Shapiro，Allison LB 等人，PloS one？vol。11,7 e0159575.，圖 2，doi:10.1371/journal.pone.0159575

SIRT1 活性檢測試劑盒 (ab156065)

在 EX-527 ( ab141506 )存在的情況下重組 SIRT1 對 SIRT1 底物去乙醯化的時間過程

SIRT1 活性檢測試劑盒 (ab156065)

重組 SIRT1 對 SIRT1 底物去乙醯化的時間過程

ab156065 – SIRT1 活性測定試劑盒（螢光法）

重組SIRT1活性的劑量依賴性曲線

ab156065 – SIRT1 活性測定試劑盒（螢光法）

測量先前以抗 SIRT1 抗體免疫沉澱的樣本中的 293T 細胞內源性 SIRT1 活性。

• Product name

  SIRT1 Activity Assay Kit (Fluorometric)
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• Detection method

  Fluorescent

• Sample type

  Cell culture extracts, Tissue Extracts

• Assay type

  Enzyme activity

• Assay time

  1h 00m

• Species reactivity

  Reacts with: Mouse, Rat, Human

   

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