【角膜上皮細胞-Corneal epithelial cells】ABMGOOD貨號T0737

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角膜上皮細胞(Corneal epithelial cells) | 貨號T0737 細胞數量1×10⁶ cells / 1.0 ml

åçä»ç´¹ 角膜上皮細胞(Corneal epithelial cells)在原代培養中往往難以保持未分化狀態(undiffentiated state)，並且成功地生產immortalized human line主要限於涉及致癌轉化(oncogenic transformation)的方法。永生化人角膜上皮細胞 (HCE-S) 在來自屍體角膜組織(Immortalized Human Corneal Epithelial Cells)的成纖維細胞(fibroblasts)培養物中自發地出現，隨後被Clone分離並傳代。 HCE-S 與原代培養物保持高度的形態相似性，表達一套與角膜上皮細胞功能相關的標誌物（如 ABCG2、細胞角蛋白 3 和 PAX 6 以及整合素(integrins) α9 和 β1），並表現出對epidermal growth factor的反應性在增殖(proliferation)、遷移(migration)和劃傷試驗(scratch wound assays)中。 HCE-S 是研究角膜上皮細胞生物學(corneal epithelial cell biology)許多方面的有用工具，包括再生(regeneration)和對生長因子(growth factors)、藥物(drugs)或毒性(toxicity)的反應，另外還有在沒有培養基補充劑(media supplements)的情況下能夠在無塗層基質(uncoated substrates)上生長。

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SKU	T0737
Species	Human (H. sapiens)
Tissue/Organ/Organ System	Eye
Donor Gender	Female
Growth Properties	Adherent
Cell Morphology	Epithelial
Immortalization Method	Spontaneous
Applications	For Research Use Only
Unit quantity	1×10⁶ cells / 1.0 ml
Cell Type	Immortalized Cells
Expression Profile	Pancytokeratin, cytokeratin 3, ABCG2, α9 integrin, PAX 6, β1 integrin
Preservation Protocol	1. Freeze Medium: 90% FBS and 10% DMSO. 2. Storage Temperature: Liquid nitrogen vapour phase.
QC	1) Scanning/transmission electron microscopy analysis; 2) Immunocytochemistry; 3) RT-PCR; 4) Western blot; 5) Scratch wound/proliferation/migration assay

角膜上皮細胞(Corneal epithelial cells)細胞株 | 不杇方法 : Spontaneous | 器官來源Eye | 細胞培養條件: 使用PriCoat™T25培養瓶 (貨號G299)，表面塗有I型膠原組成的細胞外基質，以最佳化初代和不朽細胞的生長、增殖和擴增。或塗層細胞外基質(Applied Cell Extracellular Matrix) 增強細胞貼附 (貨號G422)。Grow cells in ECM-coated culture vessels unless otherwise specified in the Propagation Requirements below.. 培養液PriGrowIII (貨號 TM003)。為了製備完整的生長培養基，將下列組分添加到基礎培養基中：胎牛血清（TM999）至最終濃度10％，，和Penicillin/Streptomycin青黴素/鏈黴素溶液（G255）至最終濃度為1％。二氧化碳（CO2）：5％，溫度：37.0℃。

黴漿菌PCR偵測 | DAPI染核 | 細胞內黴漿菌去除劑 | 水浴槽抑菌劑 | 噴霧式去黴劑等系列商品

Abmgood不朽化系列商品 (immortalized reagenet) Ready-to-use

Abmgood公司於人類與老鼠不朽之細胞株上，具有幾十年的實驗經驗；提供一系列不朽 (immortalized)化之細胞株、及不朽化之試劑商品。ready-to-use定量好之retrovirus、lentiviru、 adenovirus，可直接加於細胞中進行感染表現；病毒液包括有SV40重組病毒、EBV重組病毒、hTERT病毒液、Myc基因病毒液、p53基因病毒液、Rb基因病毒液、Ras基因病毒液。提供106及109兩種包裝力價之病毒液；亦提供一系列病毒力價濃縮與定量試劑商品。

細胞不朽化的工具中，SV40 T antigen是最簡單且最常用來造成不朽化細胞生成的方法。多數的病毒基因和抑癌基因（p53、Rb等）的不活化相關，會誘導細胞處於replicative senescence的階段。目前也有研究顯示被感染的細胞，SV40 T anbtigen會誘導端粒酶（Telomerase）的活性。與端粒（telomere）長度相關的Telomerase Reverse Transcriptase protein (TERT)是一種不朽細胞的研究應用。平常細胞中，hTERT是處於不活化態，必要時會進行活化保持telomere的長度，避免細胞發生replicative senescence的現象。某些細胞hTERT 過度表現（over-expression）對於誘發細胞不朽化是無效的（如初代上皮細胞），反而會造成細胞死亡；同時表現hTERT catalytic subunit以及p53或RB siRNA在人類初代卵巢上皮細胞會造成細胞不朽化。過度表現Ras或Myc T58A mutants也有初代細胞不朽化的現象產生。

Decomplement加熱非活化FBS：

1.讓FBS瓶在4°C下完全解凍過夜。

2.將FBS瓶置於56°C的水浴中30分鐘。

Decomplemented FBS可以在-20°C下長期保存。避免頻繁的凍融循環。每2-3天更換一次完整的媒體。不要讓介質顏色變為黃色。

Thawing細胞解凍方法：(每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式)

操作方式下載

1.在37℃水浴中解凍小瓶，直到只有一小塊冰塊。

2.將細胞轉移到含有5ml pre-warmed complete media 之15ml管中。

3.將細胞以290xg離心5分鐘。

4.小心丟棄上清液，不要打擾細胞沉澱，輕輕地上下移液，將細胞重新懸浮在1ml完全培養基中。

5.將細胞培養在150,000-200,000個細胞/ cm2。

Subculture細胞繼代方法: (每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式) 操作方式下載

1.當細胞70-90％ confluency時，建議繼代培養。

Aspirate old media。懸浮液中的一些細胞仍然是活細胞。或者，也可以收集含有懸浮細胞的上清液並離心（Skip to Step 6 in protocol）。

3.加入1：1比例的1X無菌PBS和0.25％胰蛋白酶-EDTA（TM051）。

4.在室溫下孵育細胞3-5分鐘並攪拌培養容器直至90％的細胞脫落。

中和胰蛋白酶:添加等量之trypsin + PBS。

6.收集細胞並以290xg離心5分鐘。

7.丟棄上清液，輕輕地上下移液，將細胞重新懸浮在完全培養基中。

8.建議split ratio比不超過1：3。

Freezing細胞凍結：(每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式)操作方式下載

Complete growth medium with decomplemented FBS to a final concentration of 50% from PAN Biotech (P40-37500) or from Nucleus Biologics (FBS1824-001) and 5% DMSO.

儲存溫度：液氮氣相。重要提示：此細胞係對FBS批次非常敏感。我們強烈建議最終用戶使用從PAN biotech或Nucleus Biologics 之FBS。