Lentivirus慢病毒純化 |低速30分純化套組 貨號LV999
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Lentivirus慢病毒純化 |低速30分純化套組 貨號LV999
重組慢病毒載體(Recombinant lentiviral vectors) 已被證明是穩定基因轉移(stable gene transfer)的有力工具體外(in vitro)和體內(in vivo)分裂(dividing)和非分裂細胞(non-dividing cells)。通過多年的經驗與慢病毒載體(lentiviral vectors)，abmgood 開發了自己專有的 pLenti-combo 包裝混合物(pLenti-combo packaging mix)和一種快速生產重組慢病毒載體(recombinant lentiviral vectors)的有效方案，其滴度(titers)高達107國際單位/毫升。快捷、簡單純化(purify)和濃縮(concentrate)慢病毒顆粒近100 倍。
【病毒低速純化】 慢病毒低速30分純化套組 (100倍濃縮) (Cat. No. LV999)
傳統的病毒純化方法，大多利用超高速離心(ultracentrifuge)，搭配濃度梯度(CsCl)等方法進行病毒分離，需要純熟技術且過程費時。Speedy Lentivirus purification KIT快速慢病毒純化是帶正電的基質溶液，與帶負電的慢病毒結合，形成沉澱，可通過低速離心沉澱。可直接應用於FBS 及calcium含量之病毒液濃縮，不影響其 純化之效能。 Speedy Lentivirus purification KIT病毒純化套組可免除使用超高速離心，更簡單、快速取得高濃度病毒液。30分鐘內快速純化病毒、可達濃縮效果約100x (10X使用, 100ML包裝)。
What is the mechanism of purification for the Speedy Lentivirus
快速慢病毒純化的純化機制(mechanism)是什麼？ Speedy 慢病毒純化是一種帶正電荷的基質溶液(positively charged matrix solution)，與帶負電荷的慢病毒結合，形成沉澱(precipitation)，可透過離心沉澱。
293 cells 感染純化前（A）與純化後（B）的lentivirus 48hr後的結果
從培養物中收集慢病毒上清液 (lentiviral supernatant)。收集的上清液 (supernatant) 以2500 g 離心10 分鐘，沉澱細胞碎片(cell debris); 並通過 0.45 μm 注射器過濾器(syringe filter)過濾(filter)。
- 將上步過濾後的病毒上清液，每 45 ml 病毒上清加入 5 ml Speedy Lentivirus Purification，倒置(inversion)溶液並徹底混合。(此步驟需反應完整，或於4度C O/N)
- 4°C ≥ 5000g 離心 10 分鐘以收集病毒顆粒(pellet)。
- 完全倒出上清液。此時Pellet為病病顆粒; 小心且不要破壞病毒顆粒(pellet)。
- 加入 0.45 ml – 4.5 ml 含血清培養基中以完全重新懸浮病毒顆粒(pellet)。 (具體取決於病毒需要濃度)
- 立即分裝重新懸浮的病毒並儲存在 -70°C。(避免反覆冷凍解凍)
293T 細胞株被廣泛用作慢病毒生產的最佳細胞株。轉染時293T細胞的健康狀況是慢病毒生產成功的關鍵因素。使用「不健康」細胞會對轉染效率產生負面影響，導致慢病毒庫存滴度較低。為了獲得最佳慢病毒生產效果，請在轉染前按照以下指南培養 293T 細胞： 確保細胞活力大於 90%。 在通過之前不要讓細胞過度生長。 使用傳代次數少於16 代的細胞。 確保293T 細胞沒有Mycoplasma污染。
Lentivirus慢病毒低速30分純化套組(純化) | Lentivirus 慢病毒高濃度純化套組(純化) | Lentivirus病毒定量快篩片(定量) | Lentivirus病毒一個步驟QPCR定量套組(定量)
| 產品編號 | 產品名稱 | 包裝 |
| LV999 | Speedy Lentivirus Purification | 100ml |
| LV900 | qPCR Lentivirus Titration(Titer) Kit | 100 Reactions |
| LV998 | Ultra-Pure Lentivirus Purification Kit－可純化病毒濃度達1011病毒顆粒 | 1 Kit |
| G171 G172 G173 |
PuRetro™ Lentivirus Purification Kit | 2 Standard Units 5 Standard Units 2 Giga Units |