失巢凋亡(Anoikis) 測定試劑盒｜Anoikis Assay Kit貨號K694-100 (abcam ab284938)
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細胞基礎研究 ｜Cell-base assay
Anoikis Assay Kit
商品: Anoikis測定試劑盒｜貨號: K694-100 (ab284938)
產品介紹: 失巢凋亡(Anoikis) 是由正常細胞不能附著於細胞外基質（ECM）誘導的細胞凋亡形式。 不正確的附著或沒有ECM附著會影響正常細胞的細胞生長和分化。 然而，研究已經確定，轉移性細胞可以經歷失巢凋亡(Anoikis) 而不影響其遷移和侵入周圍或遠端器官的能力。 BioVision的失巢凋亡(Anoikis) 測定試劑盒可以螢光（Calcein AM）試劑和模擬失巢凋亡(Anoikis) 條件的專有塗層室的活細胞。Biovision測定是易於使用，具靈敏感和可使用螢光儀 ( Ex/Em = 485/530 nm)檢測。
圖1：失巢凋亡(Anoikis) 檢測：細胞為3T3-NIH和Hela。 3T3細胞在Anoikis Chamber（coated）中經歷Anoikis（凋亡），而癌細胞克服了失巢凋亡(Anoikis) ，並能夠在不存在Anchorage的情況下生長（Chamber Control, Uncoated）。沒變 在未塗覆的平板中觀察到細胞生長沒變。
| Size | 100 assays |
| SKU+Size | K694-100 |
| Detection Method | Fluorescence (Ex/Em = 485/530 nm) |
| Species Reactivity | Mammalian cells |
| Applications | Measure cell anoikis in response to stimuli. Screen, study, or characterize compounds that influence Anoikis. HTP adaptable |
| Features & Benefits | • Highly sensitive fluorometric method to measure cell Anoikis in response to a variety of biochemical stimuli • Simple & High throughput-adaptable • Reproducible, Quantitative tool for screening, studying, and characterizing compounds that affect Anoikis |
| Kit Components | • Assay Buffer • Anoikis Chamber • Chamber Control (Uncoated) • Calcein AM Dye |
其它商品: 【定量分析商品】 膽固醇排出螢光分析套組 | CETP膽固醇酯轉運蛋白ELISA | Irisin競爭型ELISA | Free Fatty Acid呈色螢光分析 | Triglyceride三酸甘油酯定量分析 【染色商品】 Lipid脂質染色套組 | 膽固醇染色套組 【萃取商品】脂肪組織蛋白質萃取
操作流程 (標準依原廠公告)
1.細胞生長：將所需細胞建議的培養基和培養條件下培養至約80％。收穫細胞並以1,000離心x g，持續5分鐘。沉澱細胞。將細胞沉澱重懸於培養基中，並使用血球細胞計數器或自動細胞計數器，計算細胞數量。以1 x 106 cells/ml (培養基)。無菌操作台(laminar flow hood)下打開Anoikis Chamber和Chamber Control (Uncoated) ；以100 µl無菌測定緩衝液(sterile Assay Buffer) 洗滌兩次。加入100 µl細胞懸液 (cell suspensions)至Anoikis Chamber 及 the Chamber Control (Uncoated)
注意：適當的incubation time取決於所用的單個細胞類型和細胞濃度。因此，建議，確定每個實驗的最佳incubation time。
2.處理：用Anoikis enhancing或inhibiting reagents處理細胞。對於background control，用vehicle處理細胞。培養細胞24-72小時。在37ºC和5％的二氧化碳。incubation time和培養條件取決於cell line，需要對其進行調整。
3.數據收集和分析：經過誘導劑/抑製劑預期的溫育後，小心取下plate cover。加入2 µl鈣黃綠素AM將96孔抗固定板或控制板的每個孔中的染料染色檢測到。孵育板30-60分鐘。在37ºC下。微觀監控細胞鈣黃綠素AM（綠色通道）螢光的存在。螢光可以用螢光儀器測量(Ex: 485 nm and Em: 530 nm)。從處理過的樣品中減去背景對照(background control)。