即用型IHC試劑盒 | Ready-to-use IHC kit 貨號SL-IHC100T

Ready-to-use IHC kit (Biotin free), One-Step HRP Polymer anti-Mouse and Rabbit IgG (H+L) with DAB 

產品描述：

免疫組織化學（Immunohistochemistry , IHC）/免疫細胞化學（Immunocytochemistry , ICC）是通過使用標記的抗體作為特異性試劑，通過抗原 – 抗體相互作用來定位組織切片/細胞中的抗原，抗原 – 抗體相互作用通過諸如螢光染料(fluorescent dye) 、酶(enzyme) 、放射性元素(radioactive element) 或膠體金的標記物等讓表現可視化。 通常使用幾種IHC技術，例如標記的生物素二抗鏈黴抗生物素蛋白 – 過氧化物酶 (labeled biotin secondary antibody streptavidin-peroxidase, HRP) ，抗HRP-HRP，ABC催化的信號放大，polymer system聚合物系統（一步或兩步）等，以檢測組織和細胞中的抗原。即用型IHC試劑盒採用聚合物技術( polymer system)，可提高靈敏度和檢測靈敏度。 針對抗小鼠和抗兔 polymer，不同於免疫生物素/抗生物素蛋白的系統 (biotin/avidin free system) 它為用戶提供了快速且易於使用的IHC檢測系統。

	Product	Size	Storage	Remark
1	Citrate buffer (0.01mol/L, pH6.0)	1L	4℃	Solute in 1L of deionized water or distilled water
2	PBS buffer	2L	4℃	Solute in 2L of deionized water or distilled water
3	DON-HRP-Conjugated polyase (anti mouse / rabbit)	6mL	4℃	Non-frozen, 50μL per slice
4	30% H2O2	10mL	4℃	Dilute into 3% , ready to use
5	DAB solution I	0.6mL	-20℃	Ready to use
6	DAB solution II	0.6mL	-20℃	Ready to use
7	hematoxylin	6ml	4℃	–

 

Cat # +Size	SL-IHC100T
Size	100 tests
Species Reactivity	Mouse and rabbit
Applications	A biotin/avidin free system that stains membrane, cytoplasmic and nuclear antigens. Immunohistochemistry (IHC) and immunocytochemistry (ICC).
Features & Benefits	• Simple procedure • Fast and convenient • The assay is sensitive and stable
Kit Components	• Citrate buffer (0.01mol/L, pH6.0), 1L  (4℃) • PBS buffer, 2L (4℃) • DON-HRP-Conjugated polyase (anti mouse / rabbit), 6ML  (4℃) • 30% H2O2 , 10ML  (4℃) • DAB solution I, 0.6ML (-20℃) • DAB solution II, 0.6ML (-20℃)• hematoxylin, 6ML  (4℃)

 

套組內不包含Washing buffer |  Retrieval Solution |  positive or negative control | primary antibody | 螢光封片劑 。

 

1.烤片及脫蠟切片在65℃恆溫烤箱中烘烤1h；在二甲苯 I (xylene I) 中浸泡15分鐘，然後在二甲苯II (xylene II) 中浸泡15分鐘。

2.水化將脫蠟後的切片用100%酒精I (100% alcohol I)、100%酒精II (100% alcohol II)、95%酒精(95% alcohol)、85%酒精(85% alcohol) 和75%酒精(75% alcohol)浸泡，並用自來水沖洗10min。

3. 抗原修復在含0.01M檸檬酸鈉緩衝液 (0.01M sodium citrate buffer solution)（參考125℃·103KPa）的培養基中修復15min，自然冷卻

4. 封閉(blocking-up) 將載玻片置於3% H2O2中，濕盒中反應10min，消除內源過氧化物酶(endogenous peroxidase activity)活性。

5. 密封 將載玻片放入5% BSA中，在濕盒中反應1 30min，再用PBS溶液清洗3min*3次。

6. 孵育一抗加入一抗（選擇最佳稀釋比）反應，在濕盒中以4℃反應過夜，以PBS溶液洗滌3min*3次。

7. 孵育二抗 除去 PBS 溶液，加入 50 µL DON-HRP-Conjuated，將濕盒孵育，室溫放置 20min-30min。 PBS 溶液洗滌 3min*3 次

8. 顯色 DAB染色（DAB溶液I和DAB溶液II按1:1混合），當切片變色時，立即用自來水沖洗染色液。

9.蘇木精染色蘇木精再染3min，1%鹽酸酒精分化，鏡檢控制染色程度。用自來水沖洗10分鐘。

10. 脫水 將樣本浸泡在75%、85%、95%、100%酒精I、100%酒精II中5分鐘。

11.將透明和密封玻片置於二甲苯中3min*2次，透明中性膠密封。