血管生成(Angiogenesis)-Angiogenesis (Tube Formation) Assay

血管生成(Angiogenesis)是從預先存在的脈管系統產生新血管(new blood vessels )的過程，是生長(growth)和發育(development)、傷口癒合(wound healing)、組織肉芽生成(tissue granulation)和惡性腫瘤(malignant tumors)形成所必需的。 血管生成( angiogenesis i)的快速評估包括測量內皮細胞形成三維管狀結構( three-dimensional tube-like structures)的能力。血管新生作用是由內皮細胞(endothelial cells)所引導的，過程中細胞會分泌酵素來分解基底膜，造成細胞之遊走，經由一連串的增生分化後，最後形成管狀般的血管構造。

血管生成（管形成）分析 | 貨號K905-50 (Abcam ab204726)

Angiogenesis (Tube Formation) Assay

BioVision的血管形成試驗( Tube Formation Assay, K905)提供了一個強大的方法來確定血管生成（ angiogenesis) (in vitro）不到18小時。 該檢測試劑盒提供了一種評估血管生成的簡單，易於執行的半定量工具。可以偵測血管細胞血管形成之inducers及inhibitors分析。

Extracellular Matrix Solution 2 X 1.25 ml

Wash Buffer 10 ml

Staining Dye Concentrate 25 µl

Inhibitor Control -Vinblastine (2 µM) 10 µl

Cat # +Size	K905-50 (Abcam ab204726)
Size	50 assays
Detection Method	Light & Fluorescence microscope
Applications	Screening inhibitors and stimulators of angiogenesis Study of angiogenesis related signal transduction
Features & Benefits	• Robust method to determine angiogenesis (in vitro) in less than 18 hrs • Simple & convenient • semi-quantitative tool for assessing angiogenesis
Kit Components	• Extracellular Matrix Solution (2 vials) • Wash Buffer • Staining Dye Concentrate • Inhibitor Control -Vinblastine (2 µM)

Extracellular Matrix Solution細胞外基質溶液：長期（6個月）儲存，我們建議在無菌條件下分幾次並在-20°C儲存。 避免凍結解凍循環。 始終在冰上或4°C無霜冰箱中緩慢融化。 溫度高於4°C會迅速膠凝胞外基質溶液。 解凍可能需要在4°C過夜。 解凍的矩陣可以存儲在2-8°C一個星期。Inhibitor Control抑制劑控制組 – -Vinblastine長春鹼：-20°C保存。 用對照 – 長春鹼進行的處理將根據細胞類型而變化。 內皮細胞系（EA.hy926細胞），推薦使用終濃度1 pmol / L。 在Wash中稀釋Vinblastin 。

血管生成（管形)分析操作介紹

細胞培養：將培養的內皮細胞以所需培養基培養至〜90％密度（含有5％CO 2的37℃培養箱）。無菌條件下下收穫細胞。並於在含有0.5-5％血清的所需培養基中Resuspend細胞。

血管生成：預冷的（在冰上）96孔無菌細胞培養板每孔中加入50μl解凍的細胞外基質溶液。確保凝膠在井壁表面均勻分佈（輕輕搖動或輕敲以展開）。 37°C孵育1小時，使溶液形成凝膠。使用大約1-2×10 ^{4 內皮細胞}/100μl培養基/孔。將細胞添加到凝固物上細胞外基質凝膠或對照孔（無細胞外基質凝膠或具有長春鹼的細胞外基質孔）。添加血管生成因素/調節器到所需Well。在含有5％CO2的37℃培養箱中培養細胞4-18小時。

數據分析：使用 pipette小心移除培養基而不干擾細胞或細胞外基質凝膠。輕輕地洗用100μl洗滌緩衝液清除血清。小心地取出清洗緩衝液。準備100μl/孔染色染料工作

將染色濃縮物1：200（例如5μl染色濃縮物在995μl洗滌緩衝液中）按照使用well數。每孔加入100μlStaining Dye工作溶液。孵育30分鐘。在37℃下。檢查內皮管使用光和螢光顯微鏡（綠色過濾器）形成。我們建議每個well收集幾張圖像。有幾個選項可用於分析圖片。對於手動分析，我們推薦使用圖像處理軟件。圖片J（從NIH免費）。對於自動分析，我們推薦使用WimTube圖像分析工具。它基於小管特徵即小管的數量，連接的數量，小管長度和環的數量。