Abmgood藥物篩選平台 | 細胞系列商品 (immortalized cell)

牙齦成纖維細胞(Gingival fibroblasts)在口腔傷口癒合(oral wound healing)中起著重要作用，並且是牙齦結締組織(gingival connective tissue)的主要成分。這些細胞對於測試新型牙科材料的“生物相容性 (biocompatibility) ”或毒性 (toxicity) 很重要。過去，已經使用非人類和人類惡性細胞株(human malignant cell lines) （例如L929，CCL163，CCL171和SaOS2）進行了體外毒性測試 (toxicity tests)。然而，由於所述細胞株的惡性，結果可能或可能與臨床無關。永生化人牙齦成纖維細胞-hTERT (Human Gingival Fibroblasts- hTERT) 在生物相容性評估中與初代人牙齦成纖維細胞具有相同的形態學細胞反應，因此可用於評估牙科材料的毒性。

牙齦成纖維細胞 | 貨號T0026 細胞數量1×10⁶ cells / 1.0 ml

Immortalized Human Gingival Fibroblasts- hTERT

Immortalized Human Gingival Fibroblasts- hTERT

Organism	Homo sapiens
Source Organ	Gingiva
BioSafety Level	II
Growth Properties	Adherent
Morphology	Spindle shaped
Recommended Seeding Density	7,000-10,000 cells/cm2; Recommended split ratio is 1:2 to 1:3
Population Doubling	50-60 hours
Immortalization Method	Serial passaging and transduction with recombinant retroviruses carrying hTERT gene
Description	Gingival fibroblasts play an important role in oral wound healing and are the major constituents of the gingival connective tissue. These cells are important in testing the “biocompatibility”, or toxicity of new dental materials. In the past, toxicity tests in vitro have been performed with non-human and human malignant cell lines such as L929, CCL163, CCL171 and SaOS2. However, due to the malignancy of the described cell lines, the results may or may not be clinical relevant. The Immortalized Human Gingival Fibroblasts- hTERT have the same morphological cellular response in biocompatibility evaluation to primary human gingival fibroblasts and can thus be used to evaluate toxicity of dental materials.
Depositor Information	Yonsei University
Applications	For research only. The Immortalized Human Gingival Fibroblast -hTERT is unique that 1. The cells retained similar cytotoxicity response pattern to their primary counterparts (in response to phenol, gold, titanium and amalgam); 2. The cells retained identical phenotype to that of their primary counterparts; 3. The cells have a diploid status, showing genomic stability.
Markers	Vimentin and actin

Immortalized Human Gingival Fibroblasts- hTERT細胞株

不杇方法 : Serial passaging and transduction with recombinant retroviruses carrying hTERT gene | 器官來源Gingiva | 細胞培養條件:。Grow cells in培養液PriGrowIII (貨號 TM003)。為了製備完整的生長培養基，將下列組分添加到基礎培養基中：胎牛血清（TM999）至最終濃度10％，和Penicillin/Streptomycin青黴素/鏈黴素溶液（G255）至最終濃度為1％。二氧化碳（CO2）：5％，溫度：37.0℃。

 黴漿菌PCR偵測 | DAPI染核 | 細胞內黴漿菌去除劑 | 水浴槽抑菌劑 | 噴霧式去黴劑 等系列商品

Abmgood不朽化系列商品 (immortalized reagenet) Ready-to-use

Abmgood公司於人類與老鼠不朽之細胞株上，具有幾十年的實驗經驗；提供一系列不朽 (immortalized)化之細胞株、及不朽化之試劑商品。ready-to-use定量好之retrovirus、lentiviru、 adenovirus，可直接加於細胞中進行感染表現；病毒液包括有SV40重組病毒、EBV重組病毒、hTERT病毒液、Myc基因病毒液、p53基因病毒液、Rb基因病毒液、Ras基因病毒液。提供106及109兩種包裝力價之病毒液；亦提供一系列病毒力價濃縮與定量試劑商品。

細胞不朽化的工具中，SV40 T antigen是最簡單且最常用來造成不朽化細胞生成的方法。多數的病毒基因和抑癌基因（p53、Rb等）的不活化相關，會誘導細胞處於replicative senescence的階段。目前也有研究顯示被感染的細胞，SV40 T anbtigen會誘導端粒酶（Telomerase）的活性。與端粒（telomere）長度相關的Telomerase Reverse Transcriptase protein (TERT)是一種不朽細胞的研究應用。平常細胞中，hTERT是處於不活化態，必要時會進行活化保持telomere的長度，避免細胞發生replicative senescence的現象。某些細胞hTERT 過度表現（over-expression）對於誘發細胞不朽化是無效的（如初代上皮細胞），反而會造成細胞死亡；同時表現hTERT catalytic subunit以及p53或RB siRNA在人類初代卵巢上皮細胞會造成細胞不朽化。過度表現Ras或Myc T58A mutants也有初代細胞不朽化的現象產生。

Decomplement加熱非活化FBS：

1.讓FBS瓶在4°C下完全解凍過夜。

2.將FBS瓶置於56°C的水浴中30分鐘。

Decomplemented FBS可以在-20°C下長期保存。避免頻繁的凍融循環。每2-3天更換一次完整的媒體。不要讓介質顏色變為黃色。

Thawing細胞解凍方法：(每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式)

1.在37℃水浴中解凍小瓶，直到只有一小塊冰塊。

2.將細胞轉移到含有5ml pre-warmed complete media 之15ml管中。

3.將細胞以290xg離心5分鐘。

4.小心丟棄上清液，不要打擾細胞沉澱，輕輕地上下移液，將細胞重新懸浮在1ml完全培養基中。

5.將細胞培養在150,000-200,000個細胞/ cm2。

Subculture細胞繼代方法: (每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式)

1.當細胞70-90％ confluency時，建議繼代培養。

2. Aspirate old media。懸浮液中的一些細胞仍然是活細胞。或者，也可以收集含有懸浮細胞的上清液並離心（Skip to Step 6 in protocol）。

3.加入1：1比例的1X無菌PBS和0.25％胰蛋白酶-EDTA（TM051）。

4.在室溫下孵育細胞3-5分鐘並攪拌培養容器直至90％的細胞脫落。

5. 中和胰蛋白酶:添加等量之trypsin + PBS。

6.收集細胞並以290xg離心5分鐘。

7.丟棄上清液，輕輕地上下移液，將細胞重新懸浮在完全培養基中。

8.建議split ratio比不超過1：3。

Freezing細胞凍結：(每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式)

Complete growth medium with decomplemented FBS to a final concentration of 50% from PAN Biotech (P40-37500) or from Nucleus Biologics (FBS1824-001) and 5% DMSO.

儲存溫度：液氮氣相。重要提示：此細胞係對FBS批次非常敏感。我們強烈建議最終用戶使用從PAN biotech或Nucleus Biologics 之FBS。

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