不朽卵巢表面表皮細胞 | Immortalized Ovarian Surface Epithelial Cells , iMOSEC貨號T0608
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Abmgood藥物篩選平台 | 細胞系列商品 (immortalized cell)
Immortalized Ovarian Surface Epithelial Cells (iMOSEC) | 貨號T0608 細胞數量1×106 cells / 1.0 ml
產品介紹: 不朽卵巢表面表皮細胞(Immortalized Ovarian Surface Epithelial Cells , iMOSEC)由腺病毒E1A(adenovirus E1A)和p53(p53DD)co-expression。除了non-tumorigenicity外,該細胞株還維持其原發性表型(primary phenotype),並表達上皮特異性標記物 (epithelial-specific markers,) 如E-cadherin、細胞素8(cytokeratin 8)和細胞素18(cytokeratin18)。此細胞系是研究卵巢生長調控(ovary growth regulation)的細胞模型。
Immortalized Ovarian Surface Epithelial Cells (iMOSEC)
| Description | The Immortalized Ovarian Surface Epithelial Cells (iMOSEC) is derived by co-expression of adenovirus E1A and dominant-negative p53 (p53DD). In addition to its non-tumorigenicity, this cell line maintains its primary phenotype and expresses epithelial-specific markers such as E-cadherin, cytokeratin 8 and 18. This cell line is a useful model for studying ovary growth regulation. |
| SKU | T0608 |
| Species | Mouse (M. musculus) |
| Species description | 11-week-old adult female C57B/6 mouse |
| Tissue/Organ/Organ System | Reproductive |
| Growth Properties | Adherent |
| Cell Morphology | Cuboidal |
| Seeding Density | Thaw entire contents into an appropriate T25 flask as specified in the Propagation instructions. |
| Immortalization Method | Serial passaging and electroporation transfection with linearized DNA of E1A and p53DD |
| Applications | For Research Use Only |
| Unit quantity | 1×106 cells / 1.0 ml |
| Cell Type | Immortalized Cells |
| Expression Profile | E-cadherin, cytokeratin 8 and cytokeratin 18. |
| Propagation Requirements |
Use of PriCoatTMT25 Flasks (G299) or Applied Cell Extracellular Matrix (G422) is required for cell adhesion to the culture vessels. Grow cells inECM-coated culture vessels unless otherwise specified in the Propagation Requirements below. The base medium for this cell line is Prigrow III medium available at abm, Cat. No. TM003. To make the complete growth medium, add the following components to the base medium: fetal bovine serum (TM999)* to a final concentration of 10% and Penicillin/Streptomycin Solution (G255) to a final concentration of 1%. |
| QC | 1. Western blot was used to confirm the presence of E1A and p53DD gene in the immortalized cell line. 2. Western blot was used to check epithelial markers E-cadherin and cytokeratin expression. |
不朽卵巢表面表皮細胞(Immortalized Ovarian Surface Epithelial Cells , iMOSEC)細胞株 | 不杇方法 : Serial passaging and electroporation transfection with linearized DNA of E1A and p53DD 。細胞培養條件: 使用PriCoat™T25培養瓶 (貨號G299)，以最佳化初代和不朽細胞的生長、增殖和擴增。或塗層細胞外基質(Applied Cell Extracellular Matrix) 增強細胞貼附 (貨號G422)。Grow cells in ECM-coated culture vessels with the following conditions. 培養液PriGrowIII (貨號 TM003)。為了製備完整的生長培養基，將下列組分添加到基礎培養基中：胎牛血清（TM999）至最終濃度10％和Penicillin/Streptomycin青黴素/鏈黴素溶液（G255）至最終濃度為1％。二氧化碳（CO2）：5％，溫度：37.0℃。Change media every 2-3 days
引用文獻 Mathew, R et al. “Immortalized mouse epithelial cell models to study the role of apoptosis in cancer” Methods in Enzymology 446:77-106 (2008). DOI: 10.1016/S0076-6879(08)01605-4.
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細胞不朽化的工具中，SV40 T antigen是最簡單且最常用來造成不朽化細胞生成的方法。多數的病毒基因和抑癌基因（p53、Rb等）的不活化相關，會誘導細胞處於replicative senescence的階段。目前也有研究顯示被感染的細胞，SV40 T anbtigen會誘導端粒酶（Telomerase）的活性。與端粒（telomere）長度相關的Telomerase Reverse Transcriptase protein (TERT)是一種不朽細胞的研究應用。平常細胞中，hTERT是處於不活化態，必要時會進行活化保持telomere的長度，避免細胞發生replicative senescence的現象。某些細胞hTERT 過度表現（over-expression）對於誘發細胞不朽化是無效的（如初代上皮細胞），反而會造成細胞死亡；同時表現hTERT catalytic subunit以及p53或RB siRNA在人類初代卵巢上皮細胞會造成細胞不朽化。過度表現Ras或Myc T58A mutants也有初代細胞不朽化的現象產生。
Decomplement加熱非活化FBS：
1.讓FBS瓶在4°C下完全解凍過夜。
2.將FBS瓶置於56°C的水浴中30分鐘。
Decomplemented FBS可以在-20°C下長期保存。避免頻繁的凍融循環。每2-3天更換一次完整的媒體。不要讓介質顏色變為黃色。
Thawing細胞解凍方法：(每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式)
1.在37℃水浴中解凍小瓶，直到只有一小塊冰塊。
2.將細胞轉移到含有5ml pre-warmed complete media 之15ml管中。
3.將細胞以290xg離心5分鐘。
4.小心丟棄上清液，不要打擾細胞沉澱，輕輕地上下移液，將細胞重新懸浮在1ml完全培養基中。
5.將細胞培養在150,000-200,000個細胞/ cm2。
Subculture細胞繼代方法: (每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式)
1.當細胞70-90％ confluency時，建議繼代培養。
- Aspirate old media。懸浮液中的一些細胞仍然是活細胞。或者，也可以收集含有懸浮細胞的上清液並離心（Skip to Step 6 in protocol）。
3.加入1：1比例的1X無菌PBS和0.25％胰蛋白酶-EDTA（TM051）。
4.在室溫下孵育細胞3-5分鐘並攪拌培養容器直至90％的細胞脫落。
- 中和胰蛋白酶:添加等量之trypsin + PBS。
6.收集細胞並以290xg離心5分鐘。
7.丟棄上清液，輕輕地上下移液，將細胞重新懸浮在完全培養基中。
8.建議split ratio比不超過1：3。
Freezing細胞凍結：(每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式)
Complete growth medium with decomplemented FBS to a final concentration of 50% from PAN Biotech (P40-37500) or from Nucleus Biologics (FBS1824-001) and 5% DMSO.
儲存溫度：液氮氣相。重要提示：此細胞係對FBS批次非常敏感。我們強烈建議最終用戶使用從PAN biotech或Nucleus Biologics 之FBS。
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