大鼠類固醇顆粒細胞穩定表達LH / CG受體（GLHR-15）|貨號T0606

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Immortalized Rat Steroidogenic Granulosa Cells stably expressing LH/CG Receptor (GLHR-15) 永生化大鼠類固醇顆粒細胞穩定表達LH / CG受體（GLHR-15） | 貨號T0606 細胞數量1×10⁶ cells / 1.0 ml

產品介紹: 永生化大鼠類固醇顆粒細胞穩定表達LH / CG受體（GLHR-15）Immortalized Rat Steroidogenic Granulosa Cells stably expressing LH/CG Receptor (GLHR-15) Lutropin / choriogonadotropin（LH / CG）受體是在卵巢顆粒和睾丸之睾丸細胞中獨特表達的受體，在卵子發生，精子發生和類固醇激素產生的調節中起著重要作用。不幸的是，LH / CG受體表達通常在原代細胞的體外培養後1-2天內丟失。穩定表達LH / CG受體的永生化大鼠類固醇顆粒細胞，對黃體生成激素（LH）或絨毛膜促性腺激素（hCG）刺激有反應，結果產生孕激素和20α-OH-P，其水平與原代細胞相當。該細胞株可用於研究與促性腺激素刺激的類固醇生成相關的分子機制。研究人員可以與表達FSH受體的永生化大鼠類固醇顆粒細胞（貨號T0605）一起，比較同源細胞系統中LH和FSH信號傳導。

Immortalized Rat Steroidogenic Granulosa Cells stably expressing LH/CG Receptor (GLHR-15) （SV40 virus）

Organism	Immature female rat
Source Organ	Ovary
BioSafety Level	II
Growth Properties	Adherent
Morphology	Other
Recommended Seeding Density	Thaw entire contents into an appropriate T25 flask as specified in the Propagation instructions.
Immortalization Method	Serial passaging and calcium phosphate mediated cotransfection by SV40 DNA and Ha-ras oncogene
Description	Lutropin/choriogonadotropin (LH/CG) receptor, a receptor uniquely expressed in ovarian granulosa and testicular sertoli cells, play an important role in the regulation of oogenesis, spermatogenesis and steroid hormone production. Unfortunately the LH/CG receptor expression is often lost within 1-2 days of in vitro culture of primary cells. The Immortalized Rat Steroidogenic Granulosa Cells stably expressing LH/CG Receptor is responsive to luteinizing hormone (LH) or choriogonadtropin (hCG) stimulation and produces progesterone and 20α-OH-P as a result at levels comparable to primary cells. This cell line is useful in studying molecular mechanisms associated with gonadotropin stimulated steroidogenesis. Together with the Immortalized Rat Steroidogenic Granulosa Cells expressing FSH Receptor (Cat. No T0605), researchers can compare the LH and FSH signaling in homologues cell systems.
Depositor Information	Yeda Research and Development Ltd
Applications	For Research Use Only

Immortalized Rat Steroidogenic Granulosa Cells stably expressing LH/CG Receptor (GLHR-15)細胞株 | 不杇方法 : Serial passaging and calcium phosphate mediated cotransfection by SV40 DNA and Ha-ras oncogene | 器官來源Ovary | 細胞培養條件: 使用PriCoat™T25培養瓶 (貨號G299)，以最佳化初代和不朽細胞的生長、增殖和擴增。或塗層細胞外基質(Applied Cell Extracellular Matrix) 增強細胞貼附 (貨號G422)。Grow cells in ECM-coated culture vessels with the following conditions. 培養液PriGrowIV(貨號 TM004)。為了製備完整的生長培養基，將下列組分添加到基礎培養基中：胎牛血清（TM999）至最終濃度10％和Penicillin/Streptomycin青黴素/鏈黴素溶液（G255）至最終濃度為1％。二氧化碳（CO2）：5％，溫度：37.0℃。為了刺激孕激素的產生，將6 nM hCG或1.2 nM LH和2 µM毛喉素加入完整的培養基中至少24小時。

黴漿菌PCR偵測 | DAPI染核 | 細胞內黴漿菌去除劑 | 水浴槽抑菌劑 | 噴霧式去黴劑等系列商品

Abmgood不朽化系列商品 (immortalized reagenet) Ready-to-use

Abmgood公司於人類與老鼠不朽之細胞株上，具有幾十年的實驗經驗；提供一系列不朽 (immortalized)化之細胞株、及不朽化之試劑商品。ready-to-use定量好之retrovirus、lentiviru、 adenovirus，可直接加於細胞中進行感染表現；病毒液包括有SV40重組病毒、EBV重組病毒、hTERT病毒液、Myc基因病毒液、p53基因病毒液、Rb基因病毒液、Ras基因病毒液。提供106及109兩種包裝力價之病毒液；亦提供一系列病毒力價濃縮與定量試劑商品。

細胞不朽化的工具中，SV40 T antigen是最簡單且最常用來造成不朽化細胞生成的方法。多數的病毒基因和抑癌基因（p53、Rb等）的不活化相關，會誘導細胞處於replicative senescence的階段。目前也有研究顯示被感染的細胞，SV40 T anbtigen會誘導端粒酶（Telomerase）的活性。與端粒（telomere）長度相關的Telomerase Reverse Transcriptase protein (TERT)是一種不朽細胞的研究應用。平常細胞中，hTERT是處於不活化態，必要時會進行活化保持telomere的長度，避免細胞發生replicative senescence的現象。某些細胞hTERT 過度表現（over-expression）對於誘發細胞不朽化是無效的（如初代上皮細胞），反而會造成細胞死亡；同時表現hTERT catalytic subunit以及p53或RB siRNA在人類初代卵巢上皮細胞會造成細胞不朽化。過度表現Ras或Myc T58A mutants也有初代細胞不朽化的現象產生。

Decomplement加熱非活化FBS：

1.讓FBS瓶在4°C下完全解凍過夜。

2.將FBS瓶置於56°C的水浴中30分鐘。

Decomplemented FBS可以在-20°C下長期保存。避免頻繁的凍融循環。每2-3天更換一次完整的媒體。不要讓介質顏色變為黃色。

Thawing細胞解凍方法：(每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式)

1.在37℃水浴中解凍小瓶，直到只有一小塊冰塊。

2.將細胞轉移到含有5ml pre-warmed complete media 之15ml管中。

3.將細胞以290xg離心5分鐘。

4.小心丟棄上清液，不要打擾細胞沉澱，輕輕地上下移液，將細胞重新懸浮在1ml完全培養基中。

5.將細胞培養在150,000-200,000個細胞/ cm2。

Subculture細胞繼代方法: (每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式)

1.當細胞70-90％ confluency時，建議繼代培養。

Aspirate old media。懸浮液中的一些細胞仍然是活細胞。或者，也可以收集含有懸浮細胞的上清液並離心（Skip to Step 6 in protocol）。

3.加入1：1比例的1X無菌PBS和0.25％胰蛋白酶-EDTA（TM051）。

4.在室溫下孵育細胞3-5分鐘並攪拌培養容器直至90％的細胞脫落。

中和胰蛋白酶:添加等量之trypsin + PBS。

6.收集細胞並以290xg離心5分鐘。

7.丟棄上清液，輕輕地上下移液，將細胞重新懸浮在完全培養基中。

8.建議split ratio比不超過1：3。

Freezing細胞凍結：(每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式)

Complete growth medium with decomplemented FBS to a final concentration of 50% from PAN Biotech (P40-37500) or from Nucleus Biologics (FBS1824-001) and 5% DMSO.

儲存溫度：液氮氣相。重要提示：此細胞係對FBS批次非常敏感。我們強烈建議最終用戶使用從PAN biotech或Nucleus Biologics 之FBS。

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<p><a href=”https://www.abmgood.com/Documents/files/Thawing-Cryopreserved-Stable-Cells-v1.pdf ” target=”_blank”>細胞解凍之操作手冊</a></p>

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