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如何選擇 『適合』的顯微鏡相機?使用科研級顯微鏡相機的理由

CCD_specification_IMG

用數位相機不好嗎?跟顯微鏡專用相機有什麼區別?

  相信很多人有拿著相機對著目鏡拍的經驗,小編也不例外。可是常常對不到焦、呈相圈明顯,或是晃動嚴重。拍照時也不好確定視野下的到底拍到的是什麼。數位相機不是不好,只是不適合。數位相機本身有鏡頭,和內建為日常攝影設定做最佳化的感光元件與軟體設置。在顯微鏡上這些設置反而是種干擾。顯微鏡專用相機不會有額外鏡片造成耗損,不會有呈像圈,更不會晃動,給您清晰的影像。

單色還是彩色?

  單純的感光元件只能感應光的強弱,並不能分辨色彩。彩色相機之所以是彩色,是因為有在感光元件前有RGB分色的塗層,讓感光元件上面的畫素感知道不同顏色光的強弱,最後再把不同顏色的強度資訊整合在一起,創造出我們熟知的彩色影像;單色感光元件就沒有分色塗層,能夠感知道所有波長光線的強弱。因為沒有塗層,感光元件的靈敏度也會較彩色感光元件來的好。在專業影像分析領域中,我們可以使用濾光片或是不同染劑,選擇我們需要的波長。像是螢光影像的擷取的場合,單色相機的表現會比彩色相機要來的好。

CCD_mono_color

CCD還是CMOS?

  CCD是比較成熟的電子感光元件,有低雜訊高感光度的優點,不過製程較複雜,價格也比較貴;CMOS相較於CCD是較便宜的電子感光元件,早期在呈色與感光度上皆不如CCD的表現,不過可以滿足明視野攝影的需求。若僅有明視野影像擷取的需求,CMOS相機即可以使用。

畫素越高越好?

  『畫素越高,影像系統的等級越好』。這應該是一般人的認知,基本上也不是錯誤啦,只是沒有100%是對的。在明視野下面基本畫素越高畫質也會越好,可是在低光源下面就不一定是這樣。感光度與每個畫素的大小也有關係。把進光量當作雨滴,畫素大小當作水杯,在一定時間內可以接到的水量,畫素大小越大,可以接到的光量也越多,感光度也越好。君不見高階的螢光型相機其畫素都不會很高,反而是明視野用的顯微鏡相機的畫素都比一般的CCD相機來的高上許多。

  有人會說,畫素越高,可以得到的細節也越多。基本上是對的,前題是鏡頭素質很好。就常見的高清Full HD 格式,也只不過200萬畫素,300萬畫素即可輸出4×6 inch的相紙。太多的畫素,大多用不到。

CCD_rain

冷卻CCD?-20℃?-45℃?

  雜訊一直是電子感光元件的缺點。雜訊的來源很多,其中最大的來源是『溫度』。把溫度降低可以大幅降低雜訊。這種雜訊在平常攝影是看不到的。可是在螢光攝影時,曝光時間長,背景又多半是黑的,此時『雜訊』就很明顯。做定量實驗時,雜訊很容易影響到數值。此外,冷卻效果越好,可以曝光的時間也越長,曝光越長訊號也會越強。


顯微鏡影像感測器一些比較細部的規格,舉例說明如下:

  • 圖元大小(Pixel Size)

  指個別感應圖元的實際尺寸大小,不論是長或寬,都以μm(Micrometer)為計量單位。圖元愈大,則所需曝光成像時間較短,但卻會犧牲些許空間解析度。反之,圖元愈小,則需較久的曝光成像時間,成像之後的的解析度較好。

  • 暗電流(Dark Noise Current)

  在某特定工作溫度的條件下,遮蔽CCD的感應器,使其避免任何光源的照射或感光,而經由感測元件本身產生的電荷數(Electrons)。雜訊值的大小,以特定溫度,每秒產生的電荷數為主要單位

  • 輸出雜訊(ReadOut Noise)

  CCD正常工作時,除了真正有效的輸出訊號外,因其因素造成而隨之輸出電荷數所造成的雜訊。

  • 量子效應(Quantum Efficiency)

  直接進入或投射在感測組件上光子總數(Photons),與被感測器換成電荷數的比率。通常用百分比(%)來表示。

  • 電位井容量(Fall-well Capacity)

  每個圖素所有容納的電荷總數量。數目愈多,影像的動態範圍(Dynamic Range)愈大;更能表現影像上,任何微小明暗度的變化。

  • 模擬數位化(analog to digital)

  是CCD攝影機輸出影像訊號的格式,早期所制定的標準型CCD,多採用模擬類比的訊號輸出。現今數位化的趨勢,廠商在CCD內建類比轉數位(ADC)電路把類比訊號轉成數位訊號。攝影機能提供影像的灰階度取決於A/D轉換電路的位元數。例如8位元攝影機可以提供28=256灰階輸出;10位元的攝影機可以提供1024灰階度表現。

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