ELISA酵素免疫分析介紹

酵素免疫分析法 (Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)）為利用抗原抗體間專一性鍵結之特性，對檢體進行檢測；可應用於檢體抗原或抗體之檢測。由於結合於固體承載物上之抗原或抗體仍具免疫活性，因此設計其鍵結機制配合酵素呈色反應，可顯示特定抗原或抗體是否存在，並可利用呈色之深淺以進行定量分析。根據待測樣品與鍵結機制之不同，ELISA可設計出各種不同類型的檢測方式，主要以三明治法、間接法、以及競爭法三種方式為主。

三明治法（sandwich）ELISA酵素免疫分析

三明治法常用於檢測大分子抗原，一般操作步驟為:將具有專一性之抗體 (Captured antibody)固著於塑膠孔盤上，洗去多餘抗體。加入待測檢體，檢體中若含有待測之抗原，則其會與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結。洗去多餘待測檢體，加入對抗原專一之一次抗體(detected antibody)，與待測抗原進行鍵結洗去多餘未鍵結一次抗體(detected antibody)，加入帶有酵素之二次抗體( anti-mouse antibody)，與受質反應後ELISA讀值。若Detected antibody具Biotin標誌或HRP標誌；biotin標誌，則加入streptavidn-HRP； HRP直接標誌，則可直接wash後，兩者一樣加入酵素受質反應後以ELISA讀值。兩種抗體 (Captured antibody and detected antibody)對檢體中的抗原進行兩次專一性辨認，專一性相當高，但待測抗原必須是多價抗原，才可獲得兩種以上的專一性抗體，分別進行夾心；此法需要足夠的表位空間，以進行抗原抗體的夾心，所以並不適用於半抗原或小分子抗原等分子量較小之標的。

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間接法（indirect）ELISA酵素免疫分析

間接法常用於檢測檢體之抗體含量，一般之操作步驟為：將已知之抗原固著於塑膠孔盤上，洗去多餘之抗原；加入待測檢體，檢體中若含有待測之一次抗體，則其會與塑膠孔盤上的抗原進行專一性鍵結。洗去多餘待測檢體後，再加入帶有酵素之二次抗體，會與待測之一次抗體鍵結。最後洗去多餘未鍵結二次抗體，加入酵素受質呈色，藉儀器（ELISA reader）測定塑膠盤中的吸光值（OD值），以評估有色終產物的含量即可測量待測抗體的含量。

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競爭法（Competitive）ELISA酵素免疫分析

競爭法一般用於檢測小分子抗原，其操作步驟為將具有專一性之抗體固著於塑膠孔盤上，洗去多餘抗體。加入待測檢體，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結。加入帶有酵素之抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結，由於塑膠孔盤上固著的抗體數量有限，因此當檢體中抗原的量越多，則帶有酵素之抗原可鍵結的固著抗體就越少，亦即，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結，即所謂競爭法之由來。當檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤內留下之帶有酵素的抗原越少，顯色也就越淺。

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