雙抗夾心法ELISA檢測原理 -Sandwich  ELISA

雙抗夾心 ELISA 法是指將特異性針對待測抗原的抗體包被於 96 孔微孔板 中，製成固相載體，向微孔中分別加入標準品或標本，其中待測抗原與連接於 固相載體上的抗體結合，然後加入生物素化的針對待測抗原的抗體，形成夾心， 將未結合的生物素化抗體洗淨後，加入 HRP 標記的親和素，再次徹底洗滌後加 入 TMB 底物顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下 轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測抗原呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(O.D.值)，用於樣本中待測抗原濃度測算。

原理圖如下：

競爭抑制ELISA檢測原理-Competition ELISA

競爭抑制ELISA法是指將特異性抗體吸附於固相載體，隨後加入待測抗原（標準品和樣本）和一定量的生物素標記的抗原（檢測液A），使二者競爭與固 相抗體結合，溫育後經洗滌去掉未結合物，然後加入HRP標記的親和素，經過溫育和徹底洗滌後加入底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成最終的黃色。待測標本濃度越高，標記抗原和抗體的結合就越受到抑制，顯色愈淺。顯色的深淺與酶量呈正相關，而與樣品中待測物質含量呈負相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（O.D.值），計算樣品濃度。由於生物大分子可標記多個生物素，而生物素可以特異性結合酶標親和素，放大檢測信號，提高免疫分析敏感性。

 

小分子抗原或半抗原因僅有單個抗原表位，缺乏雙抗體夾心法所需的基本條件——具有2個或2個以上表位，所以對其常用競爭法進行測定。其原理是將待檢抗原和酶標抗原與相應固相抗體競爭結合，標本中抗原越多，與固相抗體結合的酶標抗原越少，與底物反應生成的顏色越淺，因此根據顏色深淺可定量測定。原理圖如下：