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Abmgood不朽化系列商品 (immortalized cell) |貨號 T0015  1×10⁶ cells / 1.0 ml. 

不朽大鼠心肌細胞  Immortalized Rat Cardiomyocytes | 大鼠心肌細胞培養條件: (貨號T0015)

SV40 Immortalized Rat Cardiomyocytes細胞株 | 不杇方法: Serial passaging and transduction with recombinant lentivector carrying SV40 Large T antigen | 來源Heart/neonatal | 細胞培養條件: 使用PriCoat™T25培養瓶 (貨號G299)，以最佳化初代和不朽細胞的生長、增殖和擴增。或塗層細胞外基質(Applied Cell Extracellular Matrix) 增強細胞貼附 (貨號G422)。Grow cells in ECM-coated culture vessels with the following conditions. 培養液PriGrowIII (貨號TM003)，胎牛血清(Cat. No. TM999)最終濃度為15%並填加1% Penicillin/Streptomycin 。1%. Atmosphere: air, 95%; Carbon dioxide (CO2), 5%. Temperature: 37.0°C.

 

解凍細胞株流程

1. 細胞解凍前處理: 37°C水浴中預熱完全培養基。準備好含有5mL完全培養基的15mL無菌錐形管

2.從液氮儲罐中取出冷凍保存的小瓶。

3. 細胞解凍: 將小瓶的下半部分放入37°C水浴中快速解凍細胞，60秒後取出。 解凍後仍應保留少量冰晶。【由於DMSO的存在對細胞有毒性，因此重要的是不要過度融化冷凍管】。

4.將細胞重新懸浮在小瓶中，並將細胞懸液轉移到含有5mL完全培養基的15mL無菌錐形管中。

5.以200xg離心細胞3分鐘以沉澱。

6. 準備好Culture dish

7. 將離心後之細胞, 吸掉培養基 (含DMSO)，使細胞沉澱不受干擾。

8.將新鮮培養基中的沉澱物 (細胞) 重新懸浮並在新培養容器中培養。

9.在37℃，5％CO2下培養培養物。

注意：在適用的情況下，我們建議細胞從解凍後恢復後選擇藥物添加劑。 在解凍時直接添加選擇藥物可能導致應激細胞和生存力降低。

引用文獻

Zhang Y, Nuglozeh E, Touré F, Schmidt AM, Vunjak-Novakovic G. (2009). Controllable expansion of primary cardiomyocytes by reversible immortalization. Hum Gene Ther. 2009 Dec;20(12):1687-96.

Devanathan, S et al. “Sexual dimorphism in myocardial acylcarnitine and triglyceride metabolism.” Biology of Sex Differences 7: (2016). DOI: 10.1186/s13293-016-0077-7. Application: Reactive oxygen species.

Ponce, D et al. “Comparative study of the toxic effects of Chrysaora quinquecirrha (Cnidaria: Scyphozoa) and Chironex fleckeri(Cnidaria: Cubozoa) venoms using cell-based assays.” Toxicon 106:57-67 (2015). DOI: http://dx.doi.org/10.1016/j.toxicon.2015.09.014. PubMed: 26385314. Application: cytotoxic assay.

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Abmgood不朽化系列商品 (immortalized reagenet) Ready-to-use

Abmgood公司於人類與老鼠不朽之細胞株上，具有幾十年的實驗經驗；提供一系列不朽 (immortalized)化之細胞株、及不朽化之試劑商品。ready-to-use定量好之retrovirus、lentiviru、 adenovirus，可直接加於細胞中進行感染表現；病毒液包括有SV40重組病毒、EBV重組病毒、hTERT病毒液、Myc基因病毒液、p53基因病毒液、Rb基因病毒液、Ras基因病毒液。提供106及109兩種包裝力價之病毒液；亦提供一系列病毒力價濃縮與定量試劑商品。

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細胞不朽化的工具中，SV40 T antigen是最簡單且最常用來造成不朽化細胞生成的方法。多數的病毒基因和抑癌基因（p53、Rb等）的不活化相關，會誘導細胞處於replicative senescence的階段。目前也有研究顯示被感染的細胞，SV40 T anbtigen會誘導端粒酶（Telomerase）的活性。與端粒（telomere）長度相關的Telomerase Reverse Transcriptase protein (TERT)是一種不朽細胞的研究應用。平常細胞中，hTERT是處於不活化態，必要時會進行活化保持telomere的長度，避免細胞發生replicative senescence的現象。某些細胞hTERT 過度表現（over-expression）對於誘發細胞不朽化是無效的（如初代上皮細胞），反而會造成細胞死亡；同時表現hTERT catalytic subunit以及p53或RB siRNA在人類初代卵巢上皮細胞會造成細胞不朽化。過度表現Ras或Myc T58A mutants也有初代細胞不朽化的現象產生。

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