即用型IHC試劑盒 | 貨號K405-50

Ready-to-use IHC kit (Biotin free), One-Step HRP Polymer anti-Mouse, Rat and Rabbit IgG (H+L) with DAB 

產品描述：免疫組織化學（Immunohistochemistry , IHC）/免疫細胞化學（Immunocytochemistry , ICC）是通過使用標記的抗體作為特異性試劑，通過抗原 – 抗體相互作用來定位組織切片/細胞中的抗原，抗原 – 抗體相互作用通過諸如螢光染料(fluorescent dye) ，酶(enzyme,) ，放射性元素(radioactive element) 或膠體金的標記物等讓表現可視化。 通常使用幾種IHC技術，例如標記的生物素二抗鏈黴抗生物素蛋白 – 過氧化物酶 (labeled biotin secondary antibody streptavidin-peroxidase, HRP) ，抗HRP-HRP，ABC催化的信號放大，polymer system聚合物系統（一步或兩步）等，以檢測組織和細胞中的抗原。 BioVision的即用型IHC試劑盒採用聚合物技術( polymer system)，可提高靈敏度和檢測靈敏度。 IBSC一步法，針對抗小鼠，大鼠和兔IgG（H + L） polymer，不同於免疫生物素/抗生物素蛋白的系統 (biotin/avidin free system)，可以對膜 (membrane) ，細胞質 (cytoplasmic) 和核抗原(nuclear antigens) 直接進行染色。 它為用戶提供了快速且易於使用的IHC檢測系統。

 

Cat # +Size	K405-50
Size	50 tests
Species Reactivity	Mouse, rat, and rabbit
Applications	A biotin/avidin free system that stains membrane, cytoplasmic and nuclear antigens. Immunohistochemistry (IHC) and immunocytochemistry (ICC).
Features & Benefits	• Simple procedure; takes ~ 3 hours • Fast and convenient • The assay is sensitive and stable • The TUNEL-based assay kit provides complete components including positive and negative control cells for convenient detection of DNA fragmentation in cultured cells and tissue sections.
Kit Components	• Ready-to-use, peroxidase block, hydrogen peroxide • Ready-to-use protein blocking solutions • Primary antibody dilution buffer • IBSC-one-step HRP-anti-mouse, rat, and rabbit polymer • Reagent BS (ready to use buffer & substrate) • Reagent C (conc. DAB chromogen)
Storage Conditions	2-8°C
Shipping Conditions	Gel Pack

 IHC/ICC 免疫組織化學染色步驟-冷凍，石蠟切片和細胞塗片

套組內不包含Washing buffer |  Retrieval Solution |  positive or negative control | primary antibody | 螢光封片劑 。

將試劑儲存在2-8°C，不要冷凍。使用前將試劑置於常溫，應該同時進行陽性和陰性對照組。

1.組織切片脫蠟 (Deparafinize) 和水合(hydrate )通過二甲苯 (xylene)或其他清除劑和graded alcohols使組織切片脫蠟和水合。注意事項: 對於冷凍切片(frozen sections)或細胞塗片(cell smears )使用 unfixed, acetone fixed 或適當的 fixative for the antigen 。細胞塗抹(cell smears )使用detergent – Triton or NP40 (0.1-0.2% in PBS for 10 min使滲透性。Tween20，皂甙，Digitonin或類似於leucoperm（在PBS中0.2-0.5％，持續10-30分鐘）適用於細胞質或質膜(plasma membrane)抗原。

2.用蒸餾水(distilled或去離子水(deionized water)洗滌2-3次。

3.在室溫下用過Peroxidase Block (clear cap) 切片/細胞塗片反應5-10分鐘。用蒸餾水(distilled water)洗3次。注意事項：antigen retriever （胰蛋白酶AR-6541，Pronase AR-6542，胃蛋白酶AR-6543，檸檬酸鹽緩衝液AR-6544，緩衝液(with EDTA pH 8.5 AR6545，Tris緩衝液pH 10 AR-6546），它可用於這一步。

4.用PBS或Tris saline buffer（含0.02-0.05％非離子洗滌劑，Triton X100，Tween 20或NP-40）洗滌載玻片3次。

5.切片/細胞塗片於Protein blocking solution (blue cap)，在室溫下孵育5-10分鐘。

6.Incubate sections/cell smear with primary antibody（未提供，僅提供緩衝液用於稀釋）20-30分鐘。該提供的一抗稀釋緩衝液(primary antibody dilution buffer)也可用作陰性對照。

7.用PBS洗滌載玻片5-7次。在室溫下與One-Step HRP polymer (brown cap)孵育20-30分鐘。

8.用PBS或TBS洗滌載玻片5-7次，建議使用0.025-0.05％非離子型去污劑 without

sodium azide（Triton x-100或Tween-20或NP-40）洗滌。注意事項：過氧化物酶試劑被疊氮化鈉 (sodium azide)破壞，應避免在所有緩衝液和試劑中使用。

9.用去離子水(deionized)或蒸餾水(distilled)洗2-3次。

10.在試管中，加入1 ml Reagent BS和50μl試劑C（DAB chromogen）混合 （即用型DAB試劑限7-8小時內使用完。）

11.在組織載玻片上加入幾滴即用型DAB試劑 (步驟10)，在室溫下等待6-10分鐘。 （更高溫度37°C也可用於DAB chromogen，但孵化時間應由個別實驗室確定

12.用PBS洗滌5-7次，然後用離子水(deionized)或蒸餾水(distilled)沖洗。

13.與DAB兼容的複染劑（未提供）孵育30-60秒。We prefer hematoxylin。

14.用蒸餾水(distilled )/去離子水(deionized water)清洗載玻片。

15.用適當的封片劑封片，例如SuperImmunoHistoMountTM（BV Cat.No:1219-30）