HGL5永生化人顆粒細胞 | Immortalized Human Granulosa Cells (HGL5)貨號T0650
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Abmgood藥物篩選平台 | 細胞系列商品 (immortalized cell)
永生化人顆粒細胞（HGL5）Immortalized Human Granulosa Cells (HGL5) | 貨號T0650
產品介紹: 卵巢顆粒細胞（Human ovarian granulosa cells , HGL5）是雌激素(estrogen)和孕酮產生的部位，使其成為研究類固醇生物合成(steroid biosynthesis)，類固醇代謝酶(steroid-metabolizing enzymes)，特定生長因子(growth factors)和促性腺激素(gonadotropins)的關鍵。永生化人顆粒細胞（Human ovarian granulosa cells , HGL5）表現出與原代卵巢顆粒細胞(primary ovarian granulosa cells)一致的品質; 這包括響應蛋白激酶-A活化(protein kinase-A activation)的細胞回縮(cell retraction)，產生黃體酮(progesterone) 和雌二醇(estradiol)的能力，以及雌二醇(estradiol)產生的酶，P450arom。 所有這些特徵使得永生化人顆粒細胞株(Immortalized Human Granulosa Cell Line)成為研究與類固醇生物合成和代謝相關的機制的有吸引力的模型，以及其他途徑。
| Organism | Homo sapiens |
| Source Organ | Ovaries |
| BioSafety Level | II |
| Growth Properties | Adherent |
| Morphology | Other |
| Recommended Seeding Density | 20,000 cells/cm2 |
| Immortalization Method | Serial passaging and transduction with retroviruses carrying human papilloma virus strain 16 (HPV16) oncogenes E6/E7 |
| Description | Human ovarian granulosa cells are the sites of estrogen and progesterone production, making them critical in studying steroid biosynthesis, steroid-metabolizing enzymes, particular growth factors, and gonadotropins. The Immortalized Human Granulosa Cells (HGL5) exhibits qualities consistent with primary ovarian granulosa cells; this includes cell retraction in response to protein kinase-A activation, the ability to produce progesterone and estradiol, and the enzyme integral to estradiol production, P450arom. All of these characteristics make the Immortalized Human Granulosa Cell Line an attractive model to study mechanisms relating to steroid biosynthesis and metabolism, in addition to other pathways. |
| Depositor Information | UT Southwestern |
| Applications | For Research Use Only |
| Propagation Requirements | Use of PriCoat™ T25 Flasks (G299) or Applied Cell Extracellular Matrix (G422) is required for cell adhesion to the culture vessels. Grow cells in ECM-coated culture vessels with the following conditions. The base medium for this cell line is Prigrow IV medium available at abm, Cat. No.TM004. To make the complete growth medium, add the following components to the base medium: 2% Cosmic Calf Serum (Hyclone), 2% Ultroser G (Pall Corporation), 1% ITS plus (Zen-Bio), and Penicillin/Streptomycin Solution (G255) to a final concentration of 1% Carbon dioxide (CO2): 5%, Temperature: 37.0°C.Low serum media for experiments: The base medium for this cell line is Prigrow IV medium available at abm, Cat. No.TM004. To make the complete growth medium, add the following components to the base medium: 0.2% Ultroser SF (Pall Corporation), 1% ITS plus (Zen-Bio), and Penicillin/Streptomycin Solution (G255) to a final concentration of 1% Carbon dioxide (CO2): 5%, Temperature: 37.0°C. |
Immortalized Human Granulosa Cells (HGL5) 細胞株 | 不杇方法 : Serial passaging and transduction with retroviruses carrying human papilloma virus strain 16 (HPV16) oncogenes E6/E7 | 器官來源Ovaries | 細胞培養條件: 使用PriCoat™T25培養瓶 (貨號G299)，以最佳化初代和不朽細胞的生長、增殖和擴增。或塗層細胞外基質(Applied Cell Extracellular Matrix) 增強細胞貼附 (貨號G422)。Grow cells in ECM-coated culture vessels with the following conditions. 培養液PriGrowIV (貨號 TM004)。為了製備完整的生長培養基，將下列組分添加到基礎培養基中：Cosmic Calf Serum (Hyclone)至最終濃度2%，2% Ultroser G (Pall Corporation)，1% ITS plus (Zen-Bio)，和Penicillin/Streptomycin青黴素/鏈黴素溶液（G255）至最終濃度為1％。二氧化碳（CO2）：5％，溫度：37.0℃。
用於實驗的低血清培養基：該細胞株的基礎培養基是Prigrow IV培養基，可在abm，Cat No.TM004。 為了製備完整的生長培養基，將以下組分添加到基礎培養基中：0.2％Ultroser SF（Pall Corporation），1％ITS plus（Zen-Bio）和青黴素/鏈黴素溶液（G255）至終濃度為1％。細胞株鑑定(Quality Control)（1）通過PCR定量的病毒基因的表達; （2）經由forskolin、cAMP、卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone , FSH）或促黃體激素（luteinizing hormone ,LH）處理誘導後測定cAMP、孕酮 (progesterone) 和雌二醇的產生 （3）通過Northern印跡 (North blot analysis) 分析表徵p450arom調節。
黴漿菌PCR偵測 | DAPI染核 | 細胞內黴漿菌去除劑 | 水浴槽抑菌劑 | 噴霧式去黴劑 等系列商品
Abmgood不朽化系列商品 (immortalized reagenet) Ready-to-use
Abmgood公司於人類與老鼠不朽之細胞株上，具有幾十年的實驗經驗；提供一系列不朽 (immortalized)化之細胞株、及不朽化之試劑商品。ready-to-use定量好之retrovirus、lentiviru、 adenovirus，可直接加於細胞中進行感染表現；病毒液包括有SV40重組病毒、EBV重組病毒、hTERT病毒液、Myc基因病毒液、p53基因病毒液、Rb基因病毒液、Ras基因病毒液。提供106及109兩種包裝力價之病毒液；亦提供一系列病毒力價濃縮與定量試劑商品。
細胞不朽化的工具中，SV40 T antigen是最簡單且最常用來造成不朽化細胞生成的方法。多數的病毒基因和抑癌基因（p53、Rb等）的不活化相關，會誘導細胞處於replicative senescence的階段。目前也有研究顯示被感染的細胞，SV40 T anbtigen會誘導端粒酶（Telomerase）的活性。與端粒（telomere）長度相關的Telomerase Reverse Transcriptase protein (TERT)是一種不朽細胞的研究應用。平常細胞中，hTERT是處於不活化態，必要時會進行活化保持telomere的長度，避免細胞發生replicative senescence的現象。某些細胞hTERT 過度表現（over-expression）對於誘發細胞不朽化是無效的（如初代上皮細胞），反而會造成細胞死亡；同時表現hTERT catalytic subunit以及p53或RB siRNA在人類初代卵巢上皮細胞會造成細胞不朽化。過度表現Ras或Myc T58A mutants也有初代細胞不朽化的現象產生。
Decomplement加熱非活化FBS：
1.讓FBS瓶在4°C下完全解凍過夜。
2.將FBS瓶置於56°C的水浴中30分鐘。
Decomplemented FBS可以在-20°C下長期保存。避免頻繁的凍融循環。每2-3天更換一次完整的媒體。不要讓介質顏色變為黃色。
Thawing細胞解凍方法：(每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式)
1.在37℃水浴中解凍小瓶，直到只有一小塊冰塊。重要的是不要過度解凍冷凍管，因為DMSO的存在對細胞有毒。
2.將細胞轉移到含有5ml pre-warmed complete media 之15ml管中。
3.將細胞以290xg離心5分鐘。
4.小心丟棄上清液，不要打擾細胞沉澱，輕輕地上下移液，將細胞重新懸浮在1ml完全培養基中。
5.將細胞培養在20,000 cells/cm2。
Subculture細胞繼代方法: (每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作)
1.當細胞70-90％ confluency時，建議繼代培養。
2.Aspirate old media。懸浮液中的一些細胞仍然是活細胞。或者，也可以收集含有懸浮細胞的上清液並離心（Skip to Step 6 in protocol）。
3.以1X無菌PBS和稀釋0.25％胰蛋白酶-EDTA（TM051）至最終濃度為0.05%。Dilute Trypsin-EDTA (TM050) to final concentration of 0.05%
4.在室溫下孵育細胞3-5分鐘並攪拌培養容器直至90％的細胞脫落。
5.中和胰蛋白酶:添加等量之trypsin + PBS。
6.收集細胞並以200xg離心5分鐘。
7.丟棄上清液，輕輕地上下移液，將細胞重新懸浮在完全培養基中。
8.建議split ratio比不超過1：3。
Freezing細胞凍結：(每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式)
Complete growth medium with decomplemented FBS to a final concentration of 50% from PAN Biotech (P40-37500) or from Nucleus Biologics (FBS1824-001) and 5% DMSO.
冷凍液配方(Freeze Medium): 含有20％FBS和10％DMSO的完全生長培養基。 細胞儲存溫度( Storage Temperature): 液氮氣相Liquid nitrogen vapour phase。