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Abmgood不朽化系列商品 (immortalized cell)

永生化毛囊真皮乳頭細胞 – SV40 (貨號T0500) Immortalized Hair Follicle Dermal Papilla Cells -SV40

 人毛囊真皮乳頭細胞是從頭皮毛囊細胞外基質中分離出的頭髮乳頭分離的高活性間充質細胞。 真皮乳頭細胞通過涉及毛囊細胞的上皮 – 間質相互作用在控制毛髮生長周期和產生中起重要作用。 它們的存活由信號轉導途徑如ERK和Akt調節。 這些細胞可用於發育和評估毛髮生長產物並鑑定毛囊內的細胞群。 此外，它們可用於雄激素阻斷試劑的體外篩選，因為它們具有雄激素受體。

Immortalized Hair Follicle Dermal Papilla Cells – hTERT毛囊真皮乳頭細胞Adherent / Multipolar | 不杇方法: hTERT | 來源Hair Follicle (Female捐贈種族白種人) 。細胞培養條件: 使用PriCoat™T25培養瓶 (貨號G299) 以最佳化初代和不朽細胞的生長、增殖和擴增。或塗層細胞外基質(Applied Cell Extracellular Matrix) 增強細胞貼附 (貨號G422)。Grow cells in ECM-coated culture vessels with the following conditions. 培養液PriGrowI II(貨號 TM003)，胎牛血清(Cat. No. TM999)最終濃度為10%並填加1% Penicillin/Streptomycin 。1%. Atmosphere: air, 95%; Carbon dioxide (CO2), 5%. Temperature: 37.0°C細胞特性: 40-42 hours。型態為Multipolar.。建議繼代細胞數為6,000 – 10,000 cells per cm^2。細胞培養液更換大約2-3天；細胞繼代為胰蛋白酶溶液0.25% trypsin(TM050) 的下37℃下incubator 3-5分鐘，直到細胞環繞，在顯微鏡下不時監測。細胞外基質Coating dish，用PBS稀釋G422（1：1）並塗覆更少的時間。膠原蛋白含量較高，從而使與細胞的結合更強。可以嘗試減少incubator時間以及塗覆更薄的層。

Cat. No.	T0500
Name	Immortalized Hair Follicle Dermal Papilla Cells – SV40
Description	Human Hair Follicle Dermal Papilla cells are highly active mesenchymal cells isolated from the hair papilla embedded in extracellular matrix of scalp hair follicles. Dermal Papilla Cells play a significant role in controlling the hair growth cycle and production by involving in the epithelial-mesenchymal interaction of hair follicle cells. Their survival is regulated by signal transduction pathways such as ERK and Akt. These cells can be used for development and evaluation of hair growth products and identifying cell populations within the hair follicle. In addition, they can be used for in vitro screening of androgen blocking reagents since they have androgen receptors.
Organism	Human (H. sapiens)
Tissue	Hair Follicle
Donor History	Male, 66, Caucasian
Growth Properties	Adherent, multipolar
Cell Type	Immortalized Cells
Storage Condition	Vapor phase of liquid nitrogen, or below -130°C.
Shipping Conditions	Ship with dry ice.
Product Format	Frozen
Intended Use	This product is intended for laboratory research use only. It is not intended for any animal or human therapeutic use, any human or animal consumption, or any diagnostic use.
BioSafety	II
Certificate of Analysis	For batch-specific test results, refer to the applicable certificate of analysis that can be found at www.abmgood.com.
Growth Conditions	Use of PriCoat™ T25 Flasks (G299) or Applied Cell Extracellular Matrix (G422) is required for cell adhesion to the culture vessels. PriGrow III (TM003) + 10% FBS + 1% Penicillin/Streptomycin Solution (G255), 37.0°C, 5% CO₂

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Abmgood不朽化系列商品 (immortalized reagenet) Ready-to-use

Abmgood公司於人類與老鼠不朽之細胞株上，具有幾十年的實驗經驗；提供一系列不朽 (immortalized)化之細胞株、及不朽化之試劑商品。ready-to-use定量好之retrovirus、lentiviru、 adenovirus，可直接加於細胞中進行感染表現；病毒液包括有SV40重組病毒、EBV重組病毒、hTERT病毒液、Myc基因病毒液、p53基因病毒液、Rb基因病毒液、Ras基因病毒液。提供106及109兩種包裝力價之病毒液；亦提供一系列病毒力價濃縮與定量試劑商品。

細胞不朽化的工具中，SV40 T antigen是最簡單且最常用來造成不朽化細胞生成的方法。多數的病毒基因和抑癌基因（p53、Rb等）的不活化相關，會誘導細胞處於replicative senescence的階段。目前也有研究顯示被感染的細胞，SV40 T anbtigen會誘導端粒酶（Telomerase）的活性。與端粒（telomere）長度相關的Telomerase Reverse Transcriptase protein (TERT)是一種不朽細胞的研究應用。平常細胞中，hTERT是處於不活化態，必要時會進行活化保持telomere的長度，避免細胞發生replicative senescence的現象。某些細胞hTERT 過度表現（over-expression）對於誘發細胞不朽化是無效的（如初代上皮細胞），反而會造成細胞死亡；同時表現hTERT catalytic subunit以及p53或RB siRNA在人類初代卵巢上皮細胞會造成細胞不朽化。過度表現Ras或Myc T58A mutants也有初代細胞不朽化的現象產生。

Abmgood不朽化系列商品 (immortalized cell)

根據細胞類型，Primary cells初代細胞在體外具有小於10-50次傳代的有限壽命。 不朽化細胞株能夠延長增殖，並且具有與親代組織相似或相同的基因型和表現型。

哺乳動物細胞的不朽化Immortalized策略

存在用於在培養物中不朽化哺乳動物細胞的幾種方法。 Abmgood多年研發經驗，開發出了一系列Immortalized商品；包括即用型逆轉錄病毒，慢病毒和腺病毒載體。

Gene Overexpressed	Viruses Offered	Application
hTERT	Adenovirus, Lentivirus, Retrovirus	可靠和常用。 可能在一些細胞類型（例如上皮細胞）中引起細胞死亡
SV40 T Antigen	Adenovirus, Lentivirus, Retrovirus	可靠和常用。 通常用於不朽化上皮細胞。
EBV genes	Epstein-Barr Virus	不朽化B淋巴細胞，有時是T淋巴細胞。
HPV E6-E7	Lentivirus	不朽化角化細胞。
HOXB8, HOXA9, HOXA10	Lentivirus	不朽化造血細胞，包括巨噬細胞，造血祖細胞和骨髓祖細胞。
Adenoviral E1A-E1B	Lentivirus	不朽化大範圍的初級囓齒動物細胞，包括羊水細胞，原發性上皮細胞，成纖維細胞和原代腎細胞。
p53, Rb siRNA	Lentivirus	與hTERT共表達以更好地使上皮細胞不朽化。
Bmi1	Lentivirus	不朽化上皮細胞。
CDK4	Lentivirus	與hTERT共同表達更真實的細胞模型。
Myc T58A (c-Myc), Ras V12 (H-Ras)	Lentivirus	不朽化各種細胞，包括神經幹細胞，初代腎細胞，成紅細胞和各種上皮細胞（原發性前列腺，乳腺，氣道等）。

 

Thawing細胞解凍方法：(每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式) 操作方式下載

1.在37℃水浴中解凍小瓶，直到只有一小塊冰塊。(DMSO對細胞有毒性，over-thaw過度解凍下可能造Stress)

2.將細胞轉移到含有5ml pre-warmed complete media 之15ml管中。

3.將細胞以290xg離心5分鐘。

4.小心丟棄上清液，不要打擾細胞沉澱，輕輕地上下移液，將細胞重新懸浮在1ml完全培養基中。

5.將細胞培養在50,000 – 100,000 cells/cm²。 cells will have viability of around 40-50%. Post thawing, it will need 4-5 days for cells to recover in culture; Recommended split ratio is 1:4 to 1:5

DMSO在細胞凍存中的應用

二甲基亞碸是一種重要的滲透型細胞保護劑。在深低溫（零下200度）保存細胞時凍存過程中，為防止細胞內液冰晶形成、滲透壓改變、細胞結構紊亂等導致的損傷，有必要使用含有DMSO冷凍保護劑。DMSO能夠快速穿透細胞膜進入細胞中，降低冰點、延緩凍存過程，同時提高細胞內離子濃度，減少細胞內冰晶的形成，從而減少細胞損傷。深低溫時二甲基亞碸的細胞毒性受到抑制。復蘇時動作要快，儘快洗掉二甲基亞碸，否則會造成對細胞嚴重的毒性。二甲基亞碸（DMSO）是目前最好的細胞凍存保護劑，但也是一種以細胞毒性很大的化學試驗劑。研究結果表明，培養液中DMSO濃度為10%時，細胞生長抑制率近100%；1‰濃度時抑制率為35%，即使是0.04‰的濃度，DMSO對細胞的生長也有不利的影響。

Subculture細胞繼代方法: (每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式) 操作方式下載

1.當細胞70-90％ confluency時，建議繼代培養。

2. Aspirate old media。懸浮液中的一些細胞仍然是活細胞。或者，也可以收集含有懸浮細胞的上清液並離心（Skip to Step 6 in protocol）。

3.加入1：1比例的1X無菌PBS和0.25％胰蛋白酶-EDTA（TM051）。

4.在室溫下孵育細胞3-5分鐘並攪拌培養容器直至90％的細胞脫落。

5. 中和胰蛋白酶:添加等量之trypsin + PBS。

6.收集細胞並以290xg離心5分鐘。

7.丟棄上清液，輕輕地上下移液，將細胞重新懸浮在完全培養基中。

8.建議split ratio比不超過1：3。

Freezing細胞凍結：(每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式) 操作方式下載

Complete growth medium with decomplemented FBS to a final concentration of 50% from PAN Biotech (P40-37500) or from Nucleus Biologics (FBS1824-001) and 5% DMSO.

儲存溫度：液氮氣相。重要提示：此細胞係對FBS批次非常敏感。我們強烈建議最終用戶使用從PAN biotech或Nucleus Biologics 之FBS。

慢病毒包裝系列產品Lentivirus慢病毒低速純化(純化) | Lentivirus 慢病毒高濃度純化(純化) | Lentivirus病毒RT-QPCR定量(定量)