BRITER 穩定細胞株｜ BMP Responsive Immortalized Reporter (BRITER) Cell Line貨號T3015

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特點

報導基因穩定細胞株商品Reporter cell lines

Reporter gene報導基因研究，將細菌，細胞培養物，動物或植物中另一種感興趣的基因調節序列架構於在表現載體上。Abmgood提供系列報導基因螢光素酶，GFP，RFP，雙重報告基因和UTR，穩定表現等細胞株。螢光素酶通常用作報告基因，以評估感興趣的啟動子下螢光素酶基因的遺傳構建體之轉錄活性。螢光素酶穩定的細胞可用於動物模型中的非侵入性可視化，應用於生物體的特徵鑑定和測量。

BMP Responsive Immortalized Reporter (BRITER) Cell Line｜貨號T3015

骨形態發生蛋白（Bone morphogenetic proteins ,BMP）可用作治療劑，用於在bone fracture骨折，spinal injury脊髓損傷或surgery手術後的創傷部位促進骨骼的再生，但其效能局限於systemic-wide side effects全身性的副作用，專門的輸送系統的必要性以及化合物體內半衰期短而有所不同。

生成BMP反應性永生化記錄（BMP Responsive Immortalized Reporter , BRITER）細胞，進行高通量化學和分子遺傳之篩選，以鑑定BMP信號的新型小分子替代之激活物。細胞是永生化的tamoxifen他莫昔芬,可誘導的Bmp2, Bmp4雙重條件敲除鼠之顱骨成骨細胞;表達BRE/具螢火蟲螢光素酶（FFLuc）基因和SV40啟動子/增強子依賴性海腎螢光素酶（RRLuc）基因。FFLuc活性於BMP信號傳導活性而增加，而RRLuc基因作為內部對照，以限制由非特異性激活細胞過程（例如細胞增殖）引起的假陽性數。此外，通過加入4-hydroxytamoxifen 4-羥基他莫昔芬可以增強對外源性BMP信號傳導的敏感性，通過加入Bog2和Bmp4基因的Bmp2和Bmp4基因的敲除可降低內源性BMP信號的水平，從而導致BRE活化的特異性和高效報告物

BioSafety Level	II
Organism	Bmp2^c^/c;Bmp4^c^/c; R26CreER Neonatal Mouse
SourceOrgan	Calvariae
Growth Properties	Adherent
Morphology	Multipolar
Recommended Seeding Density	Thaw entire contents into an appropriate T25 flask as specified in the Propagation instructions.
Markers	Osterix, CollA1, BSP, Runx, Osteocalcin, Alkaline phosphatase
Applications	For Research Use Only

Reporter cell lines產品系列	細胞株貨號	細胞株物種	包裝
Luciferase (Luc2) Stable TRAMP Cell Line	T3008	Mus musculus	1×10⁶ cells/1.0 ml
Luciferase Stable U87MG/ΔEGFR Cell Line	T3009	Homo sapiens	1×10⁶ cells/1.0 ml
Luciferase Stable PC3 Cell Line	T3006	Homo sapiens	1×10⁶ cells/1.0 ml
Luciferase Stable WM-266-4 Cell Line	T3013	Homo sapiens	1×10⁶ cells/1.0 ml
BMP Responsive Immortalized Reporter (BRITER) Cell Line	T3105	Bmp2^c^/c;Bmp4^c^/c; R26CreER Neonatal Mouse	1×10⁶ cells/1.0ml
AZ-AHR Stable HepG2 Luciferase Reporter Cell Line	T3102	Homo sapiens	1×10⁶ cells/1.0ml
AZ-GR Stable HeLa Luciferase Reporter Cell Line	T3103	Homo sapiens	1×10⁶ cells/1.0ml
AIZ-AR Stable 22Rv1 Luciferase Reporter Cell Line	T3104	Homo sapiens	1×10⁶ cells/1.0ml
HeLa Overexpressing Stable tCD-Luc2 Cell Line	T6023	Homo sapiens	1×10⁶ cells/1.0ml

Decomplement加熱非活化FBS：

1.讓FBS瓶在4°C下完全解凍過夜。

2.將FBS瓶置於56°C的水浴中30分鐘。

Decomplemented FBS可以在-20°C下長期保存。避免頻繁的凍融循環。每2-3天更換一次完整的媒體。不要讓介質顏色變為黃色。

Thawing細胞解凍方法：(每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式)

1.在37℃水浴中解凍小瓶，直到只有一小塊冰塊。

2.將細胞轉移到含有5ml pre-warmed complete media 之15ml管中。

3.將細胞以290xg離心5分鐘。

4.小心丟棄上清液，不要打擾細胞沉澱，輕輕地上下移液，將細胞重新懸浮在1ml完全培養基中。

5.將細胞培養在150,000-200,000個細胞/ cm2。

Subculture細胞繼代方法: (每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式)

1.當細胞70-90％ confluency時，建議繼代培養。

2. Aspirate old media。懸浮液中的一些細胞仍然是活細胞。或者，也可以收集含有懸浮細胞的上清液並離心（Skip to Step 6 in protocol）。

3.加入1：1比例的1X無菌PBS和0.25％胰蛋白酶-EDTA（TM051）。

4.在室溫下孵育細胞3-5分鐘並攪拌培養容器直至90％的細胞脫落。

5. 中和胰蛋白酶:添加等量之trypsin + PBS。

6.收集細胞並以290xg離心5分鐘。

7.丟棄上清液，輕輕地上下移液，將細胞重新懸浮在完全培養基中。

8.建議split ratio比不超過1：3。

可以使用PolyIC（5μg/ ml），CpG（2mM）或LPS（5μg/ ml）進行刺激。這些細胞對FBS的要求特別敏感，因此，建議使用相同的批次培養能夠支持其培養的最佳結果的細胞。我們還建議在完整培養基中添加額外的1％Hepes以促進細胞繁殖。

Freezing細胞凍結：(每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式)

Complete growth medium with decomplemented FBS to a final concentration of 50% from PAN Biotech (P40-37500) or from Nucleus Biologics (FBS1824-001) and 5% DMSO.

儲存溫度：液氮氣相。重要提示：此細胞係對FBS批次非常敏感。我們強烈建議最終用戶使用從PAN biotech或Nucleus Biologics 之FBS。

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