心血管疾病相關研究-腎損傷/腎病

心血管疾病（CVD）是全球發病和死亡的主要原因。 CVD的基礎包括對最終阻礙血液流動的心臟和血管的損害。 這種廣泛的疾病包括冠狀動脈疾病（例如心肌梗塞或心臟病發作，心絞痛等），心律失常，中風，先天性心臟病和腎/血管疾病。 CVD的多重危險因素包括年齡，飲食，生活習慣變化，遺傳傾向和高血壓家族史，糖尿病和/或肥胖。 BioVision提供全面的產品組合，包括測定試劑盒，重組蛋白，抗體和生物化學品，以促進心血管生物學，藥物開發和生物標誌物發現研究。

羥脯氨酸測定試劑盒 |貨號K555-100 (abcam ab222941) 

Hydroxyproline Colorimetric Assay Kit

原理介紹: 羥脯氨酸（4-羥脯氨酸）是常見的非蛋白原性氨基酸。僅在哺乳動物的膠原蛋白和彈性蛋白中發現，但在植物中存在許多其它蛋白質。羥脯氨酸僅作為肽鏈中的翻譯後修飾形成，脯氨酸羥化酶不會使游離脯氨酸羥基化。組織水解物中的羥脯氨酸是直接測量膠原蛋白或明膠的量。據信各種疾病狀態會影響膠原周轉，並可引起血清或尿液羥脯氨酸升高。這些病症範圍從腫瘤，炎症，腎或骨疾病到內分泌和自身免疫性疾病。 BioVision的羥脯氨酸測定試劑盒旨在測量組織或蛋白質/肽水解產物中的羥脯氨酸。如果已經經過了先前的純化過程，它可用於測量其他生物樣品如血清或尿液中的羥脯氨酸。這是一種容易，方便的方法，其導致在560nm處具有最大吸光度的色原體。該測定在0.1-2微克範圍內有用。

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引用文獻

試劑製備：

Chloramine T Reagent氯胺T試劑：對於每個待分析的孔，加入6μl氯胺T濃縮液到94μl氧化緩衝液中並混合好。DMAB試劑：對於每個要分析的孔，加入50μl的DMAB濃縮液到50μl的高氯酸/異丙醇溶液中，拌勻。 保持冰，避光。

注意：試劑濃縮物供應穩定。 一旦濃縮液被稀釋到工作濃度，2-3個小時內使用完。所以只需要製作盡可能多的試劑以便量化樣品數量和標準。

樣品製備：

組織或蛋白質/肽樣品如肺組織應在dH2O中勻漿，使用100μlH2O/10毫克的組織。向100μl樣品勻漿中加入100μl濃HCl（約12N，未提供），在壓力下，聚四氟乙烯加蓋小瓶並在120℃水解3小時。在尿液的情況下，用相同體積的濃縮水樣尿液HCl（約12N;即100μl尿液+100μlHCl）中，在壓力密封的聚四氟乙烯加蓋的小瓶中。在120°C水解3小時（操作手冊註c）。澄清尿樣用活性炭加活性炭4毫克。渦旋並以10000×g離心3分鐘。去除沉澱和活性炭。如果需要重複。轉移10μL的每個水解樣品到96孔板，蒸發至在真空下乾燥。對於未知的樣品，我們建議進行一個試驗實驗和測試不同的樣品稀釋度，以確保讀數在標準曲線範圍內。內源性化合物可能干擾反應。為確保測試樣品中羥脯氨酸的準確測定，我們建議使用已知量的標準品（0.4μg）加標樣品。對於樣品水解，聚丙烯小瓶產生最好的結果。我們推薦Biovision的聚丙烯瓶和蓋子(M1353和M1352）。

標準曲線製備：

將10μl 1mg / ml標準品加入到90μl的標準曲線中，將羥脯氨酸標準品稀釋至0.1mg / ml dH2O拌勻。每孔中加入0,2,4,6,8,10μl產生0.2,0.4,0.6,0.8和1μg/孔的羥脯氨酸標準品。

3.反應：向每個樣品和標準品中加入100μl氯胺T試劑，並在室溫下孵育5分鐘。加向每個孔中加入100μl的DMAB試劑並孵育90分鐘。在60℃下。

4.測量：在酶標儀上測量560nm處的吸光度。

5.計算：通過從所有讀數中減去0羥脯氨酸標準物的值來校正背景背景閱讀可能是重要的，必須減去）。繪製標準曲線。將樣本讀數應用於標準（B）中獲得羥脯氨酸量。