【血管內皮細胞 (EA.hy926) 】 Immortalized Human Vascular Endothelial Cells貨號T0735
Abmgood不朽系列商品 (immortalized cell)-Immortalized Human Vascular Endothelial Cells (EA.hy926)
永生化人血管內皮細胞 (EA.hy926)(貨號T0735) 1×106 cells / 1.0 ml
永生化人血管內皮細胞 (Immortalized Human Vascular Endothelial Cells, EA.hy926) 是通過 HUVE 細胞與 A549/8 細胞融合( A549/8 cell)而開發的。這些細胞表達Weibel-Paade小體，是研究這種內皮細胞器的有價值的實驗模型。Expression Profile: 血管性血友病因子 (von Willebrand factor, vWF)、GMP-140、前列環素( prostacyclin)、血小板激活因子( platelet activating factor)、組織纖溶酶原激活劑(tissue plasminogen activator)、I 型纖溶酶原激活劑抑製劑(plasminogen activator inhibitor type I)、血栓調節蛋白(thrombomodulin)、玻連蛋白受體(vitronectin receptor )。
永生化人血管內皮細胞細胞株特性
細胞型態: Polygonal/Adherent。 來源Blood Vessel。解凍後，細胞需要4-5天才能恢復培養。細胞培養條件: 使用PriCoat™T25培養瓶 (貨號G299)，表面塗有I型膠原組成的細胞外基質，以最佳化初代和不朽細胞的生長、增殖和擴增。或塗層細胞外基質(Applied Cell Extracellular Matrix) 增強細胞貼附 (貨號G422)。培養液 Prigrow III medium, TM003 (貨號 TM003)+ 10% FBS +100 µM hypoxanthine, 0.4 µM aminopterin, and 16 µM thymidine (HAT) 1% Penicillin/Streptomycin Solution (G255), 37.0°C, 5% CO₂。 必需購買培養液PriGrow III (TM003)。
| Cat. No. | T0735 |
| Name | Immortalized Human Vascular Endothelial Cells (EA.hy926) |
| Description | Immortalized Human Vascular Endothelial Cells (EA.hy926) was developed via fusion between a HUVE cell with an A549/8 cell. The cells express Weibel-Pa]ade bodies, and is a valuable experimental model to study this organelle of the endothelium. |
| Category | Immortalized Cell Lines |
| Cell Type | Immortalized Cells |
| Organism | Human (H. sapiens) |
| Tissue | Blood Vessel |
| Cell Morphology | Polygonal |
| Growth Properties | Adherent |
| Expression Profile | von Willebrand factor (vWF), GMP-140, prostacyclin, platelet activating factor, tissue plasminogen activator, plasminogen activator inhibitor type I, thrombomodulin, vitronectin receptor |
HOT!! 黴漿菌PCR偵測 | DAPI染核 | 細胞內黴漿菌去除劑 | 水浴槽抑菌劑 | 噴霧式去黴劑 等系列商品
Abmgood不朽化系列商品 (immortalized reagenet) Ready-to-use
Abmgood公司於人類與老鼠不朽之細胞株上，具有幾十年的實驗經驗；提供一系列不朽 (immortalized)化之細胞株、及不朽化之試劑商品。ready-to-use定量好之retrovirus、lentiviru、 adenovirus，可直接加於細胞中進行感染表現；病毒液包括有SV40重組病毒、EBV重組病毒、hTERT病毒液、Myc基因病毒液、p53基因病毒液、Rb基因病毒液、Ras基因病毒液。提供106及109兩種包裝力價之病毒液；亦提供一系列病毒力價濃縮與定量試劑商品。
細胞不朽化的工具中，SV40 T antigen是最簡單且最常用來造成不朽化細胞生成的方法。多數的病毒基因和抑癌基因（p53、Rb等）的不活化相關，會誘導細胞處於replicative senescence的階段。目前也有研究顯示被感染的細胞，SV40 T anbtigen會誘導端粒酶（Telomerase）的活性。與端粒（telomere）長度相關的Telomerase Reverse Transcriptase protein (TERT)是一種不朽細胞的研究應用。平常細胞中，hTERT是處於不活化態，必要時會進行活化保持telomere的長度，避免細胞發生replicative senescence的現象。某些細胞hTERT 過度表現（over-expression）對於誘發細胞不朽化是無效的（如初代上皮細胞），反而會造成細胞死亡；同時表現hTERT catalytic subunit以及p53或RB siRNA在人類初代卵巢上皮細胞會造成細胞不朽化。過度表現Ras或Myc T58A mutants也有初代細胞不朽化的現象產生。
Abmgood不朽化系列商品 (immortalized cell)
根據細胞類型，Primary cells初代細胞在體外具有小於10-50次傳代的有限壽命。 不朽化細胞株能夠延長增殖，並且具有與親代組織相似或相同的基因型和表現型。
哺乳動物細胞的不朽化Immortalized策略
存在用於在培養物中不朽化哺乳動物細胞的幾種方法。 Abmgood多年研發經驗，開發出了一系列Immortalized商品；包括即用型逆轉錄病毒，慢病毒和腺病毒載體。
| Gene Overexpressed | Viruses Offered | Application |
| hTERT | Adenovirus, Lentivirus, Retrovirus |
可靠和常用。 可能在一些細胞類型（例如上皮細胞）中引起細胞死亡 |
| SV40 T Antigen | Adenovirus, Lentivirus, Retrovirus |
可靠和常用。 通常用於不朽化上皮細胞。 |
| EBV genes | Epstein-Barr Virus | 不朽化B淋巴細胞，有時是T淋巴細胞。 |
| HPV E6-E7 | Lentivirus | 不朽化角化細胞。 |
| HOXB8, HOXA9, HOXA10 | Lentivirus | 不朽化造血細胞，包括巨噬細胞，造血祖細胞和骨髓祖細胞。 |
| Adenoviral E1A-E1B | Lentivirus | 不朽化大範圍的初級囓齒動物細胞，包括羊水細胞，原發性上皮細胞，成纖維細胞和原代腎細胞。 |
| p53, Rb siRNA | Lentivirus | 與hTERT共表達以更好地使上皮細胞不朽化。 |
| Bmi1 | Lentivirus | 不朽化上皮細胞。 |
| CDK4 | Lentivirus | 與hTERT共同表達更真實的細胞模型。 |
| Myc T58A (c-Myc), Ras V12 (H-Ras) | Lentivirus | 不朽化各種細胞，包括神經幹細胞，初代腎細胞，成紅細胞和各種上皮細胞（原發性前列腺，乳腺，氣道等）。 |
Decomplement加熱非活化FBS：
1.讓FBS瓶在4°C下完全解凍過夜。
2.將FBS瓶置於56°C的水浴中30分鐘。
Decomplemented FBS可以在-20°C下長期保存。避免頻繁的凍融循環。每2-3天更換一次完整的媒體。不要讓介質顏色變為黃色。
Thawing細胞解凍方法：(每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式) 操作方式下載
1.在37℃水浴中解凍小瓶，直到只有一小塊冰塊。(DMSO對細胞有毒性，over-thaw過度解凍下可能造Stress)
2.將細胞轉移到含有5ml pre-warmed complete media 之15ml管中。
3.將細胞以290xg離心5分鐘。
4.小心丟棄上清液，不要打擾細胞沉澱，輕輕地上下移液，將細胞重新懸浮在1ml完全培養基中。
5.將細胞培養在50,000 – 100,000 cells/cm2。 cells will have viability of around 40-50%. Post thawing, it will need 4-5 days for cells to recover in culture; Recommended split ratio is 1:4 to 1:5
DMSO在細胞凍存中的應用
二甲基亞碸是一種重要的滲透型細胞保護劑。在深低溫（零下200度）保存細胞時凍存過程中，為防止細胞內液冰晶形成、滲透壓改變、細胞結構紊亂等導致的損傷，有必要使用含有DMSO冷凍保護劑。DMSO能夠快速穿透細胞膜進入細胞中，降低冰點、延緩凍存過程，同時提高細胞內離子濃度，減少細胞內冰晶的形成，從而減少細胞損傷。深低溫時二甲基亞碸的細胞毒性受到抑制。復蘇時動作要快，儘快洗掉二甲基亞碸，否則會造成對細胞嚴重的毒性。二甲基亞碸（DMSO）是目前最好的細胞凍存保護劑，但也是一種以細胞毒性很大的化學試驗劑。研究結果表明，培養液中DMSO濃度為10%時，細胞生長抑制率近100%；1‰濃度時抑制率為35%，即使是0.04‰的濃度，DMSO對細胞的生長也有不利的影響。
Subculture細胞繼代方法: (每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式) 操作方式下載
1.當細胞70-90％ confluency時，建議繼代培養。
2. Aspirate old media。懸浮液中的一些細胞仍然是活細胞。或者，也可以收集含有懸浮細胞的上清液並離心（Skip to Step 6 in protocol）。
3.加入1：1比例的1X無菌PBS和0.25％胰蛋白酶-EDTA（TM051）。
4.在室溫下孵育細胞3-5分鐘並攪拌培養容器直至90％的細胞脫落。
5. 中和胰蛋白酶:添加等量之trypsin + PBS。
6.收集細胞並以290xg離心5分鐘。
7.丟棄上清液，輕輕地上下移液，將細胞重新懸浮在完全培養基中。
8.建議split ratio比不超過1：3。
Freezing細胞凍結：(每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式) 操作方式下載
Complete growth medium with decomplemented FBS to a final concentration of 50% from PAN Biotech (P40-37500) or from Nucleus Biologics (FBS1824-001) and 5% DMSO.
儲存溫度：液氮氣相。重要提示：此細胞係對FBS批次非常敏感。我們強烈建議最終用戶使用從PAN biotech或Nucleus Biologics 之FBS。
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