SERVICEBIO 細胞分析>細胞轉染系列產品- PEI 40K Transfection Reagent

PEI 40K 轉染試劑(PEI 40K Transfection Reagent) | SERVICEBIO 貨號G1802-1ML
(PEI 40K Transfection Reagent)

產品介紹:

將DNA轉染到真核細胞是研究生物機制的常用方法。一個主要目標是將基因有效且特異性地遞送到所需的目標細胞中。儘管已經開發了多種具有不同效率的技術和載體（病毒和非病毒），但大多數載體缺乏目標細胞特異性。非病毒載體因其易於操作、安全性以及所傳遞的轉基因大小的高度靈活性而具有吸引力。轉鐵蛋白感染是一種高效能核酸遞送系統，基於轉鐵蛋白受體介導的內吞作用，將 DNA 攜帶到細胞中。此外，研究表明，陽離子聚合物聚乙烯亞胺（PEI）可介導有效的基因轉移到多種細胞。在聚乙烯亞胺-轉鐵蛋白轉染系統中，PEI/DNA複合物的基因轉移效率與轉鐵蛋白受體介導的內吞作用的特定機制相結合。

此方法可將轉染效率提高 30-1,000 倍，具體取決於細胞系。這是一種極為溫和的 DNA 轉染方法，利用細胞的生理攝取機制。轉染功效取決於細胞類型、表面轉鐵蛋白受體表現量。所測試的腫瘤細胞系 B16F10 黑色素瘤、Neuro 2A 神經母細胞瘤和多種原代人類黑色素瘤細胞系均顯示出非常高的轉染率。在其他已建立的細胞系中，例如 HeLa、CHO、Jurkat、K562、HepG2 和 COS，PEI 轉鐵感染具有高效率、出色的重現性以及操作極其溫和的優點。

人類轉鐵蛋白與具有內在/固有內體活性的聚陽離子載體（聚乙烯亞胺/PEI）共價連接。 PEI 能夠濃縮 DNA 並將其輸送到細胞中，大概是透過吸附內吞作用。此外，PEI 在生理 pH 值下僅部分質子化。在內體/溶酶體內酸化後，PEI 可能充當質子海綿，質子化引發氯離子流入、滲透膨脹和內體/溶酶體囊泡的不穩定，使 DNA 釋放到胞質溶膠中。因此，無需額外的內體去穩定劑即可獲得有效的基因轉移。修飾後的 PEI 綴合轉鐵蛋白分子保持了與其同源受體結合並介導有效鐵轉運至細胞內的能力。轉鐵蛋白受體介導的內吞作用隨後發生，隨後表達輸入的 DNA。去鐵敏是一種細胞滲透性鐵螯合劑，可增加細胞表面的轉鐵蛋白受體密度，進而進一步增強基因向細胞的傳遞。

本品主要成分Pei 40K的濃度為1mg/ml。

Transfection of DNA into eukaryotic cells is a common method to study biological mechanisms. A major goal is the efficient and specific delivery of genes into the desired target cells. Although a wide panel of techniques and vectors (viral and nonviral) have been developed that work with variable efficiency, most vectors lack a target cell specificity. Nonviral vectors are attractive because of their ease of manipulation, safety, and high flexibility in the size of the delivered transgene. The Transferrinfection is a high-efficiency nucleic acid delivery system based on transferrin receptor-mediated endocytosis to carry DNA into cells. Furthermore it was shown that the cationic polymer polyethylenimine (PEI) mediates efficient gene transfer into a variety of cells. In the Polyethylenimine-Transferrinfection system, the gene transfer efficiency of PEI/DNA complexes are combined with the specific mechanism of receptor-mediated endocytosis via Transferrin receptor.

The method results in a 30–1,000-fold enhanced transfection efficiency depending on the cell line. It is an extremely gentle DNA transfection method that employs physiological uptake mechanisms of the cell. Transfection efficacy depends on the cell type, the level of surface transferrin receptor expression. Very high transfection rates have been shown for the tested tumor cell lines B16F10 melanoma, Neuro 2A neuroblastoma, and a variety of primary human melanoma cell lines. In other established cell lines, such as HeLa, CHO, Jurkat, K562, HepG2, and COS, the PEI-Transferrinfection works with high efficiences, excellent reproducibility and with the advantage of being an extremely gentle procedure.

Human transferrin is covalently linked to a polycationic carrier (Polyethylenimine/PEI) with intrinsic/ inherent endosomal activity. PEI has the capacity to condense DNA and deliver it into cells, presumably by adsorptive endocytosis. Furthermore, PEI is only partially protonated at physiological pH. Upon acidification within the endosome/ lysosome, PEI presumably acts as proton sponge with the protonation triggering chloride influx, osmotic swelling, and destabilization of the endosomal/ lysosomal vesicle enabling the release of the DNA into the cytosol. As a result, efficient gene transfer is obtained without the need for additional endosome destabilizing agents. The modified, PEI-conjugated, transferrin molecules maintain their ability to bind their cognate receptor and to mediate efficient iron transport into the cell. Transferrin receptor-mediated endocytosis occurs followed by the expression of the imported DNA. Deferrioxamine, a cell permeable iron chelator, increases the transferrin receptor density on the cell surface thus further enhancing gene delivery to the cell.

The concentration of Pei 40K, the main component of this product, is 1 mg / ml.

Component Number	Component	G1802-1ML	G1802-10ML
G1802-1	PEI 40 K Transfection Reagent	1 mL	10 mL
Instruction Manual		1 pc	1 pc

使用用法:

1.貼壁細胞轉染前準備（6孔板，其他規格參考表）：

A) 轉染前一天，將細胞以適當的密度均勻地種植在孔板中。

正式轉染後適當的密度收斂到 70 – 85%；

B）轉染前，移除原代細胞培養基，以PBS洗滌1-2次，再更換1.8 mL無血清或低血清（5%以下）基礎培養基，或Opti-MEM；不同的細胞根據特定的細胞類型具有不同的血清依賴性；

C）將施用的細胞放入培養箱中，開始轉染複合物的製備。

2.轉染前懸浮細胞的製備：

A) 轉染當天，離心適量細胞，除去培養基

以無血清或低血清（5%以下）基礎培養基重懸；

B) 將製備好的懸浮細胞放入培養箱中，開始製備

轉染複合物，轉染複合物與培養基的體積比可以

參考貼壁細胞進行適當調整。

3. 轉染複合物的製備：

A) 製備液A：無血清基礎培養基100μL及質粒DNA 2μg，吹勻

混合的；

B）B液配製：無血清基礎培養基100 L+PEI 40 K轉染6-8 μL

試劑、吹氣、混合；

C）將B液加入A液中，輕輕吹勻，室溫孵育

15分鐘形成DNA-PEI轉染複合體。

4. 轉染細胞：

A) 將上一步驟所得的轉染複合物添加到先前更換的孔板上

穿過或包圍溶液；

B) 以「8」或其他方式搖動板，使其充分混合，並在37℃、5%CO2培養箱中培養；

C) DNA-PEI 與細胞轉染複合物 4 – 6 小時顯示出更好的轉染效率，

適當延長或過夜孵育，轉染效率較好。

1. Preparation before transfection of adherent cells (6-well plate, reference table for other specifications):

A) The day before transfection, cells were appropriate to be uniformly planted in the pore plates at an

appropriate density to converge to 70 – 85% upon formal transfection;

B）Before transfection, primary cell media was removed and washed 1-twice with PBS before replacing 1.8 mL of base medium without serum or low serum (below 5%), or Opti-MEM; different cells had different serum dependence depending on the specific cell type;

C）The apped cells were placed in the incubator and preparation of transfection complexes was started.

2. Suspension cells were prepared before transfection:

A) On the day of transfection, an appropriate amount of cells were centrifuged to remove the medium

and resuspended with basal medium without serum or low serum (below 5%);

B) The prepared suspension cells were placed in the incubator and started the preparation of

transfection complexes, and the volume ratio between transfection complexes and medium could

be made with reference to adherent cells for appropriate adjustments.

3. Transfection complexes were prepared:

A) Preparation liquid A: 100 μL of serum-free base medium and 2 μg of plasmid DNA, blowing and

mixed;

B）Preparation of liquid B: 100 L of base medium without serum and 6-8 μL PEI 40 K Transfection

Reagent, blowing and mixing;

C）Solution B was added to liquid A, gently blown and mixed, and incubated at room temperature for

15 min to form a DNA-PEI transfection complex.

4. Transfected cells:

A) Add the transfection complex obtained in the previous step to the previously changed hole plate by

crossing or surrounding the solution;

B) Shake the plate “8” or other way to be fully mixed and incubated in a 37℃, 5% CO2 incubator;

C) DNA-PEI transfection complexes with cells for 4 – 6 h showed better transfection efficiency,

appropriate extension or overnight incubation and better transfection efficiency.

注意事項

1. 請使用狀態良好的健康細胞，回收細胞建議轉染至少2次後再轉染。

2. 請使用高品質、無內毒素的質粒DNA。

3. 轉染時血清濃度過高以及抗生素的使用可能會影響細胞狀態和轉染效率。

4. 適當調整不同細胞的耐受性、敏感性、轉染孵育時間長短、PEI/DNA使用比例。

5、操作時請穿戴實驗服及一次性手套。

1. Please use healthy cells in good condition and recovered cells are recommended to transage at least 2 times before transfection.

2. Please use a high-quality, endotoxin-free, plasmid DNA.

3. High concentrations of serum at transfection, as well as the use of antibiotics, may affect cell status as well as transfection efficiency.

4. Different cell tolerance, sensitivity, length of transfection incubation time, and PEI / DNA usage ratio were adjusted as appropriate.

5. Please wear experimental suits and disposable gloves when operation.

G1802-10ML	PEI 40K Transfection Reagent	10 mL
G1802-1ML	PEI 40K Transfection Reagent	1 mL
G1803-1ML	Polybrene (10 mg/mL)	1 mL
G1805-0.5ML	SweTransDNA Transfection Reagent	0.5 mL
G1806-0.5ML	SweTransRNA Transfection Reagent	0.5 mL

Servicebio台灣品牌介紹-BRAND/AGENCY/品牌介紹- Servicebio

Classfication	Cat No.	Name	Place of Origin	Spec.
Amino Acids	GC304002	L-Glutamine	產品資料	100 g
	GC304003	L-Arginine hydrochloride	產品資料	25 g
	GC304004-100g	L-Glutamine acid	產品資料	100 g
	GC304005	L-Isoleucine	產品資料	25 g
	GC304006-25g	L-Leucine	產品資料	25 g
	GC304007	L-Lysine hydrochloride	產品資料	25 g
	GC304009	L-Methionine	產品資料	25 g
	GC304010	L-Phenylalanine	產品資料	10 g
	GC304011-25g	L-Alanine	產品資料	25 g
	GC304012	L-Histidine	產品資料	25 g
	GC304013	L-Serine	產品資料	25 g
	GC304014	L-tryptophan	產品資料	5 g
	GC304016	L-Threonine	產品資料	25 g
	GC304017	L-Valine	產品資料	10 g
	GC304019	Glycine	產品資料	500 g
	GC304021	L-Histidine hydrochloride monohydrate	產品資料	25 g
	GC304022	Glycine cell culture grade 甘氨酸Glycine (細胞培養等級	產品資料	100 g
Protein Derivatives	GC305002-5g	Iodoacetamide	產品資料	5 g
	GC305003	Trypsin 1:250 Source: Porcine Pancreas	產品資料	10 g
	GC305004-5g	Pepsin 1:3000	產品資料	5 g
	GC305005	Horseradish peroxidase	產品資料	1 g
	GC305006	Bovine Serum Albumin – import	產品資料	100 g
	GC305009	Human Albumin-FITC	產品資料	0.5 mL
	GC305010	Bovine Serum Albumin BSA	產品資料	100 g
	GC305010-25G	Bovine Serum Albumin BSA	產品資料	25 g
	GC305010-50G	Bovine Serum Albumin BSA	產品資料	50 g
	GC305010-5G	Bovine Serum Albumin BSA	產品資料	5 g
	GC305013-100mg	Collagenase I	產品資料	100 mg
	GC305014-100mg	Collagenase II	產品資料	100 mg
	GC305015-100mg	Collagenase IV 膠原酶IV (Collagenase IV)	產品資料	100 mg
	GC305016-100g	Gelatine	產品資料	100 g
Hormones	GC302002-25mg	Abscisic acid	產品資料	25 mg
	GC302003	Angiotensin II	產品資料	10 mg
Biological pigments	GC307002-25g	Crystal violet	產品資料	25 g
	GC307003-5g	Trypan Blue	產品資料	5 g
	GC307005	Alcian Blue8GX	產品資料	1 g
	GC307006-5g	Bromphenol Blue	產品資料	5 g
	GC307007	Serva blue G-250	產品資料	10 g
	GC307008-5g	Congo Red	產品資料	5 g
	GC307009-25g	Alizarin Red S	產品資料	25 g
	GC307010-1g	Giemsa′s Stain	產品資料	1 g
	GC307011	Fuchsin basic	產品資料	5 g
	GC307012-10g	Ponceau S	產品資料	10 g
	GC307013	Acid red 26 2R	產品資料	5 g
	GC307014	Direct Red 80	產品資料	5 g
	GC307015-5g	Sudan Black B	產品資料	5 g
	GC307017	Aniline blue	產品資料	5 g
	GC307018	Nuclear fast red	產品資料	5 g
	GC307019	Solvent Blue 38	產品資料	5 g
	GC307020	Hematoxylin	產品資料	5 g
	GC307021	Solvent Red 43	產品資料	10 g
	GC307022	Eosin Y, water soluble	產品資料	10 g
	GC307023	Safranin O	產品資料	10 g
	GC307024	Fast Green	產品資料	10 g
	GC307026-5g	Pyronin G	產品資料	5 g
	GC307027-1g	Janus Green B	產品資料	1 g
	GC307030-10g	Brilliant Cresyl Blue	產品資料	10 g
	GC307031	Coomassie brilliant blue R-250	產品資料	5 g
	GC307034-1g	Thionine acetate	產品資料	1 g
	GC307035-1g	Cresyl Fast Violet	產品資料	1 g
	GC307036-1g	Orcein	產品資料	1 g
	GC307037-1g	Carmine	產品資料	1 g
	GC307039-10g	Mordant Blue 29	產品資料	10 g
	GC307042-5g	Oil Red O	產品資料	5 g
	GC307045-25g	Rhodamine B	產品資料	25 g
Vitamins	GC301015-25g	Vitamin C	產品資料	25 g
	GC303001	Folic acid	產品資料	5 g
	GC303004	Ribofavin	產品資料	25 g
	GC303005-5g	VitaminB6	產品資料	5 g
	GC303006-25g	VitaminB3	產品資料	25 g
	GC303008	VitaminB12	產品資料	1 g
	GC303011-25mg	NADPH-Na4	產品資料	25 mg
	GC303013-250mg	β-nicotinamide adenine dinucleotide NAD	產品資料	250 mg
	GC303014-250mg	NADH-Na2	產品資料	250 mg
Antibiotics	GC301002	Streptozocin STZ	產品資料	1 g
	GC301002-100mg	Streptozocin STZ	產品資料	100 mg
	GC301003	Penicillin G Sodium salt	產品資料	1 g
	GC301004	Ampicillin	產品資料	1 g
	GC301005	Streptomycin sulfate	產品資料	5 g
	GC301008	Kanamycin	產品資料	1 g
	GC301009	Kanamycin sulfate	產品資料	5 g
	GC301009-1g	Hygromycin B	產品資料	1 g
	GC301011	Geneticin G-418	產品資料	1 g
	GC301013	Chloramphenicol	產品資料	5 g
	GC301013-10mg	Pseudomonic acid	產品資料	10 mg
	GC301014-5g	Norfloxacin	產品資料	5 g
	GC301016	Cisplatin	產品資料	100 mg
	GC301017-100mg	Sirolimus	產品資料	100 mg
Heterocyclic compounds	GC207001	Imidazole	產品資料	10 g
	GC207002	PMSF	產品資料	5 g
	GC207003	Freund’s Adjuvant Complete	產品資料	10 mL
	GC207004	Freund’s Adjuvant Incomplete	產品資料	10 mL
Salt	GC201001	Guanidine HCl	產品資料	500 g
	GC201002	Guanidine thiocyanate	產品資料	500 g
Sugar Alcohols	GC205001	L(+)-Lactic acid	產品資料	100 g
	GC205002	Pyruvic acid sodium salt	產品資料	25 g
	GC205003	D-Glucose, anhydrous	產品資料	500 g
	GC205004-10g	D(+)-Trehalose dihydrate	產品資料	10 g
	GC205005	D(+)- Galactose	產品資料	100 g
	GC205006-10g	D-(-)Arabinose	產品資料	10 g
	GC205007-1g	DTE	產品資料	1 g
	GC205008	Glycerol	產品資料	100 mL
	GC205009	LPS	產品資料	10 mg
	GC205010	DTT	產品資料	1 g
	GC205011	IPTG	產品資料	1 g
	GC205013	Agarose	產品資料	100 g
	GC205014	Sucrose	產品資料	500 g
	GC205015	D-Sorbitol	產品資料	500 g
Solvent	GC203001	TEMED	產品資料	100 mL
	GC203002	DMSO(Dimethyl sulfoxide)	產品資料	100 mL
	GC203003	Urea	產品資料	500 g
	GC203005	DMSO cellular level	產品資料	10 mL
Complex	GC202001	EDTA	產品資料	500 g
	GC202002	EDTA -Na2	產品資料	500 g
Buffer salt	GC208001	Tris (Hydroxymethyl) Aminomethane	產品資料	500 g
	GC208003	RIS-HCL	產品資料	500 g
	GC208004-100g	BIS-TRIS	產品資料	100 g
	GC208006	N-Tris[Hydroxymethyl]Methylglycine	產品資料	100 g
	GC208007	4-propanesulfonyl morpholine	產品資料	100 g
	GC208008-25g	HEPPS	產品資料	25 g
	GC208009	HEPES, Free acid	產品資料	100 g
	GC208012-1g	TCEP·HCL	產品資料	1 g
Surfactant	GC204001	Tween-80	產品資料	100 mL
	GC204002	Tween-20	產品資料	100 mL
	GC204003	Triton X-100	產品資料	100 mL
	GC204004	Sodium dodecylsulfate	產品資料	500 g
	GC204005	Sodium dodecylsulfate	產品資料	100 g
	GC204006	Nonidet TM P40 Substitute NP-40	產品資料	100 g
	GC204007	Deoxycholic acid， sodium salt	產品資料	25 g
	GC204009-100ml	APES	產品資料	100 mL
Amine organics	GC206002	Acrylamide	產品資料	500 g
	GC206003	N’-MBA	產品資料	100 g
Polymer	GC209002-250g	PEG 8000	產品資料	250 g
	GC209003-250g	PEG 6000	產品資料	250 g
	GC209004-100g	PEG 3350	產品資料	100 g
	GC209005-500g	Poly(ethylene glycol)2000	產品資料	500 g
	GC209006-250g	Poly(ethylene glycol) 20000	產品資料	250 g
Inorganic salt	GC106001	Orthoboric acid	產品資料	500 g
	GC104004	Sodium bicarbonate	產品資料	500 g
	GC108003	Citric acid monohydrate	產品資料	100 g
	GC108004	Sodium citrate dihydrate	產品資料	100 g
	GC102001	Calcium chloride	產品資料	100 g
	GC102002	Magnesium chloride hexahydrate	產品資料	100 g
	GC102003	Potassium chloride	產品資料	500 g
	GC102004	Sodium chloride	產品資料	500 g
	GC101004	Magnesium Sulfate	產品資料	100 g
	GC101013	Ammonium persulfate	產品資料	25 g
	GC105001	Sodium phosphate monobasic	產品資料	500 g
	GC105002	Sodium Phosphate, Dibasic	產品資料	500 g
	GC105003	Potassium Phosphate Monobasic	產品資料	500 g
	GC107001	Sodium hydroxide	產品資料	100 g
	GC306001	Lodixanol	產品資料	5 g
	GC310001-100g	skimmed milk powder	產品資料	100 g