漆酶活性測定試劑盒| Laccase Activity Assay Kit-AK0319

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漆酶活性測定試劑盒| Laccase Activity Assay Kit-AK0319
Laccase Activity Assay Kit-AK0319 (Spectrophotometer, 50T/48S)
測定意義:
漆酶(Caschen, Ce1.10.3.2)是一種含銅多酚氧化酶(copper-containing polyphenol oxidase),屬於銅藍氧化物家族(copper blue oxide family),廣泛分佈於真菌( fungi)和高等植物( plants)中,有很強的氧化還原能力,在pulp bioreboxia中具有廣泛的應用、環境污染物降解(environmental pollutant degradation )和木質纖維素降解(lignocellulose degradation)及生物測定。測定原理:Caschen分解產物ABTS產生ABTS自由基,420 nm處的吸光度係數遠大於底物ABTS,可計算出ABTS自由基的生長速率。可以計算漆酶(Caschen) 的活性。
Shentian 實驗用品及儀器:天平(balance)、低溫離心機(low temperature centrifuge)、可見分光光度計(visible spectrophotometer)、1ml玻璃比色皿、恆溫水浴鍋。
Components:
Components: Extract reagent: Liquid 60 mL×1, store at 4℃;
Reagent I: Liquid 50 mL×1, store at 4℃;
Reagent II: Powder×2, store at 4℃ and protect from light.
需要但未提供的試劑和設備
Spectrophotometer, balance, low temperature desk centrifuge, transferpettor, oscillating instrument, 1 mL glass cuvette, mortar/ homogenizer, water bath, ice and distilled water.。
操作流程-樣品製備
(1)組織:按照質量(g):提取體積(mL):1:5-10的比例加入提取試劑。建議將 1 mL 提取物添加到 0.1 g 組織中。在冰上勻漿。 10000 g 4℃離心10分鐘。取上清置於冰上進行測試。 (2)細胞:按細胞數(104):提取液體積(mL)為500~1000:1。建議500 million細胞添加1 mL提取試劑。超聲波破碎細胞冰浴(功率300W,超聲3s,間隔7s,總時間3min)。 10000 g 4℃離心10分鐘。取上清置於冰上進行測試。 (3)培養基:直接檢測。
操作流程

單位定義:1個酶單位定義為每104個細胞每分鐘反應體系中氧化1nmol ABTS的酶量。Unit definition: One unit of enzyme is defined as the amount of enzyme oxidation of 1 nmol ABTS in the reaction system per minute every 104 cells.
操作流程-結果計算


注意事項:
1. 使用時配製工作液。並儘快使用它。 4℃保存1週。如果變色,則無法使用。
2. 測定前進行預實驗。如果吸光度值較高,請用提取液稀釋樣品進行適當的重新測定。並乘以計算公式中的稀釋比例。
3. blank tube是用於檢測各試劑成分質量的試管。正常條件下,OD值變化不超過0.05。
1. Prepare the working solution when it will be used. And use it as soon as possible. Keep it at 4℃ for one week. If it changes color, it cannot be used. 2. Carry out pre experiment before determination. If the absorbance value is high, please dilute the sample with the extraction solution for appropriate re determination. And multiply the dilution ratio in the calculation formula. 3. The blank tube is a test tube for testing the quality of each reagent component. Under normal conditions, the OD value does not change more than 0.05.


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