Caspase-3呈色測定試劑盒  | 貨號K106  (Abcam ab39401) 

Convenient, Highly-Sensitive Assay

Caspase系列產品介紹：

當細胞接收凋亡訊號後，將不活化態的pro-caspase轉變為活化態caspase，引發caspase cascade造成細胞凋亡。主要經由Caspases 8、9、12調控細胞凋亡的外在路徑(extrinsic pathway)、內在(intrinsic pathway)、以及ER stress，最後造成Caspases 3的活化。Biovision提供完整Caspase相關分析套組、inhibitor、substrate等各類商品。Caspase 分析套組／Substrate: 從Caspase1-13、Pan Caspase皆能分析。分析套組部分有化學呈色反應及螢光可選擇；Substrate部分有化學呈色物質pNA（λ= 400 nm）與螢光呈色物質AFC（Ex/Em＝400/505 nm）兩種可應用。Caspase Inhibitors: Caspase 抑制劑主要結合Caspase活化位，進而達到訊息抑制效果。fluoromethylketone（FMK）類的抑制劑，為主要研究抗細胞凋亡的工具之一。新一代Caspase抑制劑Q-(XXXX)-OPh，因其細胞毒性較低，且穩定性較FMK類抑制劑高，較適合在in vivo實驗中使用。

產品描述：ICE-family proteases/caspases ICE家族蛋白酶/半胱天冬酶的激活啟動哺乳動物細胞凋亡。 Caspase-3 / CPP32測定試劑盒提供了一種簡便方便的方法測定DEVD識別序列，測量Caspase-3半胱天冬酶之活性。 該測定法基於從DEVD-pNA標記底物，切割後（pNA）以400或405nm波段下，檢測量化之pNA發光。 比較來自凋亡樣品的pNA的吸光度與未誘導的對照可以確定CPP32活性的倍數增加。適用於細胞或組織之實驗 (not for plasma)，Substrate檢測之靈敏度為>1uM。該試劑盒將從樣品中檢測活性Caspase-3 (procasepase-3（無活性）蛋白水解加工成活性Caspase-3)。

Detection Method	Absorbance (400 or 405 nm)
Species Reactivity	Mammalian
Applications	Detect early/middle stages of apoptosis; differentiate apoptosis from necrosis.
Features & Benefits	• Simple one-step procedure; takes 1-2 hours • Fast and convenient • Comparison of the absorbance of pNA from an apoptotic sample with an uninduced control allows determination of the fold increase in CPP32 activity.
Kit Components	• Cell Lysis buffer • 2X Reaction Buffer • DEVD-pNA (4 mM) • DTT (1 M) • Dilution Buffer

產品使用注意事項:

1. 請確實將細胞完全溶解，將細胞沉澱重懸於裂解緩衝液中並按照數據表中所述進行反應。
2. 凋亡誘導可使用用 1-5 x 10⁶ cells) 20 hour exposure to 2 uM Camptothecin 或者10 ng/mL anti-Fas Ab做為Positive control
3. 使用新鮮解凍的DTT加於細胞裂解緩衝液中使用。Aliquot DTT so that you have enough to perform the desired number of assays. Store at -20°C.
4. 該產品可檢測蛋白水解活性。蛋白酶抑制劑會干擾Capase測定。 Caspase 3是一種半胱氨酸蛋白酶，可被大多數蛋白酶抑制劑混合物抑制。 該測定基於Caspase-3對底物DEVD-pNa的催化裂解。 因此，半胱天冬酶3的抑制會干擾測量。
5. 產品適用的樣品為 cell 及 tissue lysates，不適用於plasma 樣品 (血小板可能會干擾反應)。