【MutuDC1940永生化樹突狀細胞株】 Immortalized Mouse Dendritic Cells貨號T0528
Abmgood不朽化系列商品 (immortalized cell)-Immortalized Mouse Dendritic Cells (MutuDC1940)
Abmgood公司於人類與老鼠不朽之細胞株上，具有幾十年的實驗經驗；提供一系列不朽 (immortalized)化之細胞株、及不朽化之試劑商品。ready-to-use定量好之retrovirus、lentiviru、 adenovirus，可直接加於細胞中進行感染表現；病毒液包括有SV40重組病毒、EBV重組病毒、hTERT病毒液、Myc基因病毒液、p53基因病毒液、Rb基因病毒液、Ras基因病毒液。提供106及109兩種包裝力價之病毒液；亦提供一系列病毒力價濃縮與定量試劑商品。
細胞不朽化的工具中，SV40 T antigen是最簡單且最常用來造成不朽化細胞生成的方法。多數的病毒基因和抑癌基因（p53、Rb等）的不活化相關，會誘導細胞處於replicative senescence的階段。目前也有研究顯示被感染的細胞，SV40 T anbtigen會誘導端粒酶（Telomerase）的活性。與端粒（telomere）長度相關的Telomerase Reverse Transcriptase protein (TERT)是一種不朽細胞的研究應用。平常細胞中，hTERT是處於不活化態，必要時會進行活化保持telomere的長度，避免細胞發生replicative senescence的現象。某些細胞hTERT 過度表現（over-expression）對於誘發細胞不朽化是無效的（如初代上皮細胞），反而會造成細胞死亡；同時表現hTERT catalytic subunit以及p53或RB siRNA在人類初代卵巢上皮細胞會造成細胞不朽化。過度表現Ras或Myc T58A mutants也有初代細胞不朽化的現象產生。
永生化小鼠樹突狀細胞（MutuDC1940）| 貨號T0528
Immortalized Mouse Dendritic Cells (MutuDC1940)
野生型MutuDC1940細胞株源自CD11c：SV40LgT轉基因小鼠的常規樹突細胞的永生化脾CD8α+亞組（CD11chigh，B220-，DEC205 +，CD24high，CD11b-）。MutuDC1940細胞通過up-regulation及co-stimulatory CD40，CD80和CD86分子保留對TLR Ligands如CpG（TLR9-L）和PolyIC（TLR3-L）的反應，及lesser extent LPS (TLR4-L)刺激。除了響應PAMP之刺激和產生Th1細胞因子如IL-12外，這些細胞還能夠在MHC-I和MHC-II下presenting antigen，包括直接antigen presentation抗原呈遞和細胞cross-presentation。TLR3 knockout（目錄號T3034），TLR9 knockout（目錄號T3035）和Ifnar1 knockout（目錄號T3036）MutuDC永生化小鼠樹突狀細胞，這些樹突狀細胞系在vaccine science疫苗科學和immunotherapy免疫療法中提供了強大的工具，特別是CD8α+亞群target antigens。
MutuDC1940永生化小鼠樹突狀細胞-: 細胞特性: Adherent | 不杇方法: Isolated from C57BL/6 transgenic mice carrying SV40 Large T oncogene | 來源CD11c:SV40LgT-transgenic C57BL/6 mice。器官來源 Spleen。Cell marker: CD11c, CD24, MHC-II+, DEC205, Clec9A, B220, CD11b, IRF4, IRF8, CD4。細胞培養條件: 該細胞系的基礎培養基是IMDM（1x）+ GlutamaxTM（Gibco Ref：31980-022）。 製備完成的生長培養基，將以下組分添加到基礎培養基中：從PAN生物技術（P40-37500）或Nucleus Biologics（即FBS1824-001），1％的7.5％的去補體胎牛血清至終濃度10％ ％碳酸氫鈉溶液，50μMβ-巰基乙醇，HEPES至終濃度為1％，青黴素/鏈黴素溶液（G255）至終濃度為1％。 使用前0.22μm過濾。Quality Control (1）通過MHC-I（SIINFEKL / OT-I）和MHC-II（OVA323-339 / OT-II）限制系統評估直接抗原呈遞和交叉抗原呈遞。(2） 通過RT-PCR評估proteome profile和表面標誌物。(3）使用ELISA分析IL-12細胞因子分泌 。(4）通過功能測定評估對PAMP刺激的反應。
T0528引用文獻
1.Fuertes Marraco, SA et al. “Novel murine dendritic cell lines: a powerful auxiliary tool for dendritic cell research” Front Immunol 3:331 (2012). DOI: 10.3389/fimmu.2012.00331.
2. Duval, A et al. “Large T Antigen-Specific Cytotoxic T Cells Protect Against Dendritic Cell Tumors through Perforin-Mediated Mechanisms Independent of CD4 T Cell Help” Front Immunol 5:338 (2014). DOI: 10.3389/fimmu.2014.00338.
3. Marraco, SA et al. “Novel Murine Dendritic Cell Lines: A Powerful Auxiliary Tool for Dendritic Cell Research” Front Immunol 3:331 (2012). DOI: 10.3389/fimmu.2012.00331.
4. Fuertes Marraco , SA et al. “Novel murine dendritic cell lines: a powerful auxiliary tool for dendritic cell research” Front Immunol. 3:331 (2012). PubMed: 23162549.
5. Joshi, PS et al. “Characterization of immortalized human mammary epithelial cell line HMEC 2.6” Tumour Biol. 39(10):1010428317724283 (2017). DOI: 10.1177/1010428317724283. PubMed: 29022488.
Decomplement加熱非活化FBS (heat-inactivate FBS)：
1.讓FBS瓶在4°C下完全解凍過夜。
2.將FBS瓶置於56°C的水浴中30分鐘。
Decomplemented FBS (Heat-inactivated FBS) 可以在-20°C下長期保存。避免頻繁的凍融循環。每2-3天更換一次完整的媒體。不要讓介質顏色變為黃色。
Thawing細胞解凍方法：(每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式)
1.在37℃水浴中解凍小瓶，直到只有一小塊冰塊。
2.將細胞轉移到含有5ml pre-warmed complete media 之15ml管中。
3.將細胞以290xg離心5分鐘。
4.小心丟棄上清液，不要打擾細胞沉澱，輕輕地上下移液，將細胞重新懸浮在1ml完全培養基中。
5.將細胞培養在20,000 – 60,000 cells個細胞/ cm2。
Subculture細胞繼代方法: (每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式)
1.當細胞70-90％ confluency時，建議繼代培養。
2. Aspirate old media。懸浮液中的一些細胞仍然是活細胞。或者，也可以收集含有懸浮細胞的上清液並離心（Skip to Step 6 in protocol）。
3.加入1：1比例的1X無菌PBS和0.25％胰蛋白酶-EDTA(TM051)。
4.在室溫下孵育細胞3-5分鐘並攪拌培養容器直至90％的細胞脫落。
5. 中和胰蛋白酶:添加等量之trypsin + PBS。
6.收集細胞並以290xg離心5分鐘。
7.丟棄上清液，輕輕地上下移液，將細胞重新懸浮在完全培養基中。
8.建議split ratio比不超過1：3。
可以使用PolyIC（5μg/ ml），CpG（2mM）或LPS（5μg/ ml）進行刺激。這些細胞對FBS的要求特別敏感，因此，建議使用相同的批次培養能夠支持其培養的最佳結果的細胞。我們還建議在完整培養基中添加額外的1％Hepes以促進細胞繁殖。
Freezing細胞凍結：(每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式)
Complete growth medium with decomplemented FBS to a final concentration of 50% from PAN Biotech (P40-37500) or from Nucleus Biologics (FBS1824-001) and 5% DMSO.
儲存溫度：液氮氣相。重要提示：此細胞係對FBS批次非常敏感。我們強烈建議最終用戶使用從PAN biotech或Nucleus Biologics 之FBS。
QC檢測:
1) Direct antigen presentation and cross-antigen presentation were evaluated by the MHC-I (SIINFEKL/OT-I ) and MHC-II (OVA323-339/OT-II) restricted systems; 3) proteome profile and surface markers assessed by RT-PCR; RT-PCR; 3) IL-12 cytokine secretion analyzed using ELISA ; 4) Response to PAMP stimulation evaluated by functional assays
產品資料請按這PriCoat™ T25 Flasks | type I collagen coating | I 型膠原(type I collagen) | Applied Cell Extracellular Matrix | Prigrow III Medium初代細胞培養液
HOT!! 黴漿菌PCR偵測 | DAPI染核 | 細胞內黴漿菌去除劑 | 水浴槽抑菌劑 | 噴霧式去黴劑 等系列商品
哺乳動物細胞的不朽化Immortalized策略
存在用於在培養物中不朽化哺乳動物細胞的幾種方法。 Abmgood多年研發經驗，開發出了一系列Immortalized商品；包括即用型逆轉錄病毒，慢病毒和腺病毒載體。細胞不朽化的工具中，SV40 T antigen是最簡單且最常用來造成不朽化細胞生成的方法。多數的病毒基因和抑癌基因（p53、Rb等）的不活化相關，會誘導細胞處於replicative senescence的階段。目前也有研究顯示被感染的細胞，SV40 T anbtigen會誘導端粒酶（Telomerase）的活性。與端粒（telomere）長度相關的Telomerase Reverse Transcriptase protein (TERT)是一種不朽細胞的研究應用。平常細胞中，hTERT是處於不活化態，必要時會進行活化保持telomere的長度，避免細胞發生replicative senescence的現象。某些細胞hTERT 過度表現（over-expression）對於誘發細胞不朽化是無效的（如初代上皮細胞），反而會造成細胞死亡；同時表現hTERT catalytic subunit以及p53或RB siRNA在人類初代卵巢上皮細胞會造成細胞不朽化。過度表現Ras或Myc T58A mutants也有初代細胞不朽化的現象產生。
| Gene Overexpressed | Viruses Offered | Application |
| hTERT | Adenovirus, Lentivirus, Retrovirus |
可靠和常用。 可能在一些細胞類型（例如上皮細胞）中引起細胞死亡 |
| SV40 T Antigen | Adenovirus, Lentivirus, Retrovirus |
可靠和常用。 通常用於不朽化上皮細胞。 |
| EBV genes | Epstein-Barr Virus | 不朽化B淋巴細胞，有時是T淋巴細胞。 |
| HPV E6-E7 | Lentivirus | 不朽化角化細胞。 |
| HOXB8, HOXA9, HOXA10 | Lentivirus | 不朽化造血細胞，包括巨噬細胞，造血祖細胞和骨髓祖細胞。 |
| Adenoviral E1A-E1B | Lentivirus | 不朽化大範圍的初級囓齒動物細胞，包括羊水細胞，原發性上皮細胞，成纖維細胞和原代腎細胞。 |
| p53, Rb siRNA | Lentivirus | 與hTERT共表達以更好地使上皮細胞不朽化。 |
| Bmi1 | Lentivirus | 不朽化上皮細胞。 |
| CDK4 | Lentivirus | 與hTERT共同表達更真實的細胞模型。 |
| Myc T58A (c-Myc), Ras V12 (H-Ras) | Lentivirus | 不朽化各種細胞，包括神經幹細胞，初代腎細胞，成紅細胞和各種上皮細胞（原發性前列腺，乳腺，氣道等）。 |
ABM提供以下不朽細胞的研究工具：
- Gene Immortalization (Myc, p53, Rb, Ras) Reagents
- HPV E6-E7 Cell Immortalization Reagents
- SV40 T antigen Cell Immortalization Reagents
- EBV Cell Immortalization Reagents
- hTERT Cell Immortalization Reagents
SV40 Cell Immortalization Reagents不杤化系列商品
HPV Cell Immortalization Reagents不杤化系列商品
| Lenti-HPV-16 E6/E7 Virus | pLenti-III-HPV-16 E6/E7 | Lentivirus containing HPV-16 E6/E7 gene (106 IU/ml) | 10ml | G268 |
| Lenti-HPV-16 E6/E7 Virus, High Titer | pLenti-III-HPV-16 E6/E7 | High Titer Lentivirus containing HPV-16 E6/E7 gene (109IU/ml) | 5 x 20 μl | LV617 |
EBV Cell Immortalization Reagents不杤化系列商品
| Product |
Vector Map (Click to View) |
Description | Quantity | Cat. No. |
| EBV Virus | N/A | Virus containing EBV gene (106 IU/ml) | 10ml | G229 |
hTERT Cell Immortalization Reagents不杤化系列商品
| Product |
Vector Map (Click to View) |
Description | Quantity | Cat. No. |
| Adeno-hTERT | pAdeno-hTERT | Adenovirus containing hTERT (106 IU/ml) | 250 μl | G205 |
| Adeno-hTERT Antisense | pAdeno-hTERT Antisense | Adenovirus containing antisense hTERT (106 IU/ml) | 250 μl | G208 |
| Lenti-CMV-hTERT-GFP-2A-Puro Virus | pLenti-CMV-hTERT-GFP-2A-Puro | Lentivirus containing hTERT with a GFP Reporter & resistance to Puromycin (106 IU/ml) | 10ml | LV623 |
| Lenti-CMV-hTERT-GFP-2A-Puro Virus, High Titer | pLenti-CMV-hTERT-GFP-2A-Puro | High Titer Lentivirus containing hTERT with a GFP Reporter & resistance to Puromycin (109 IU/ml) | 5 x 20 μl | LV624 |
| Lenti-CMV-hTERT-RFP-2A-Puro Virus | pLenti-CMV-hTERT-RFP-2A-Puro | Lentivirus containing hTERT with a RFP Reporter & resistance to Puromycin (106 IU/ml) | 10ml | LV625 |
| Lenti-CMV-hTERT-RFP-2A-Puro Virus, High Titer | pLenti-CMV-hTERT-RFP-2A-Puro | High Titer Lentivirus containing hTERT with a RFP Reporter & resistance to Puromycin (109 IU/ml) | 5 x 20 μl | LV626 |
| Lenti-EF1α-hTERT Virus | pLenti-EF1a-hTERT | Lentivirus containing hTERT (106 IU/ml) | 10ml | G706 |
| Lenti-EF1α-hTERT Virus, High Titer | pLenti-EF1a-hTERT | High Titer Lentivirus containing hTERT (109 IU/ml) | 5 x 20 μl | LV616 |
| Lenti-hTERT virus | pLenti-hTERT | Lentivirus containing hTERT (106 IU/ml) | 10ml | G200 |
| Lenti-hTERT Virus, High Titer | pLenti-hTERT | High Titer Lentivirus containing hTERT (109 IU/ml) | 5 x 20 μl | LV615 |
| Lenti-hTERT Antisense virus | pLenti-hTERT Antisense | Lentivirus containing antisense hTERT (106 IU/ml) | 10ml | G201 |
| Lenti-hTERT-Neo Virus | pLenti-hTERT-Neo | Lentivirus containing hTERT with resistance to Neomycin (106 IU/ml) | 10ml | G204 |
| Lenti-hTERT-Neo Virus, High Titer | pLenti-hTERT-Neo | High Titer Lentivirus containing hTERT with resistance to Neomycin (109 IU/ml) | 5 x 20 μl | LV622 |
| Retro-E1/hTERT virus | pRetro-E1 hTERT | Retrovirus containing hTERT (106 IU/ml) | 10ml | G207 |
Gene Immortalization (Myc, p53, Rb, Ras, CDK4, BmiI) Reagents不杤化系列商品
| Product |
Vector Map (Click to View) |
Description | Quantity | Cat. No. |
| Lenti-p53 siRNA Virus | Lenti-p53 siRNA | Recombinant p53 siRNA Lentivirus (106 IU/ml) | 10ml | G219 |
| Lenti-p53 siRNA Virus, High Titer | Lenti-p53 siRNA | High Titer Recombinant p53 siRNA Lentivirus (109 IU/ml) | 5 x 20 μl | LV619 |
| Lenti-Rb siRNA Virus | Lenti-Rb siRNA | Recombinant Rb siRNA Lentivirus (106 IU/ml) | 10ml | G223 |
| Lenti-Rb siRNA Virus, High Titer | Lenti-Rb siRNA | High Titer Recombinant Rb siRNA Lentivirus (109 IU/ml) | 5 x 20 μl | LV621 |
| Lenti-Bmi1 Virus, High Titer | pLenti-Bmi1 | High Titer Recombinant Bmi1 Lentivirus (109 IU/ml) | 5 x 20 μl | LV608 |
| Lenti-Bmi1 Virus | pLenti-Bmi1 | Recombinant Bmi1 Lentivirus (106 IU/ml) | 10ml | LV610 |
| Lenti-CDK4 Virus, High Titer | pLenti-CDK4 | High Titer Recombinant CDK4 Lentivirus (109 IU/ml) | 5 x 20 μl | LV609 |
| Lenti-CDK4 Virus | pLenti-CDK4 | Recombinant CDK4 Lentivirus (106 IU/ml) | 10ml | LV611 |
| Lenti-Myc T58A Virus | pLenti-Myc T58A | Recombinant Myc T58A Lentivirus (106 IU/ml) | 10ml | G217 |
| Lenti-Myc T58A Virus, High Titer | pLenti-Myc T58A | High Titer Recombinant Myc T58A Lentivirus (109 IU/ml) | 5 x 20 μl | LV618 |
| Lenti-Ras V12 Virus | pLenti-Ras V12 | Recombinant Ras V12 Lentivirus (106 IU/ml) | 10ml | G221 |
| Lenti-Ras V12 Virus, High Titer | pLenti-Ras V12 | High Titer Recombinant Ras V12 Lentivirus (109 IU/ml) | 5 x 20 μl | LV620 |