【MutuDC1940】小鼠樹突狀細胞 Immortalized Mouse Dendritic Cells貨號T0528-ABM
Abmgood不朽化系列商品 (immortalized cell)-Immortalized Mouse Dendritic Cells (MutuDC1940)
永生化小鼠樹突狀細胞（MutuDC1940）| 貨號T0528
Immortalized Mouse Dendritic Cells (MutuDC1940)
野生型MutuDC1940細胞株源自CD11c：SV40LgT轉基因小鼠的常規樹突細胞的永生化脾CD8α+亞組（CD11chigh，B220-，DEC205 +，CD24high，CD11b-）。MutuDC1940細胞通過up-regulation及co-stimulatory CD40，CD80和CD86分子保留對TLR Ligands如CpG（TLR9-L）和PolyIC（TLR3-L）的反應，及lesser extent LPS (TLR4-L)刺激。除了響應PAMP之刺激和產生Th1細胞因子如IL-12外，這些細胞還能夠在MHC-I和MHC-II下presenting antigen，包括直接antigen presentation抗原呈遞和細胞cross-presentation。
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TLR3 knockout（目錄號T3034），TLR9 knockout（目錄號T3035）和Ifnar1 knockout（目錄號T3036）MutuDC永生化小鼠樹突狀細胞，這些樹突狀細胞系在vaccine science疫苗科學和immunotherapy免疫療法中提供了強大的工具，特別是CD8α+亞群target antigens。
MutuDC1940永生化小鼠樹突狀細胞-: 細胞特性: Adherent | 不杇方法: Isolated from C57BL/6 transgenic mice carrying SV40 Large T oncogene | 來源CD11c:SV40LgT-transgenic C57BL/6 mice。器官來源 Spleen。Cell marker: CD11c, CD24, MHC-II+, DEC205, Clec9A, B220, CD11b, IRF4, IRF8, CD4。細胞培養條件: 該細胞系的基礎培養基是IMDM（1x）+ GlutamaxTM（Gibco Ref：31980-022）。 製備完成的生長培養基，將以下組分添加到基礎培養基中：從PAN生物技術（P40-37500）或Nucleus Biologics（即FBS1824-001），1％的7.5％的去補體胎牛血清至終濃度10％ ％碳酸氫鈉溶液，50μMβ-巰基乙醇，HEPES至終濃度為1％，青黴素/鏈黴素溶液（G255）至終濃度為1％。 使用前0.22μm過濾。Quality Control (1）通過MHC-I（SIINFEKL / OT-I）和MHC-II（OVA323-339 / OT-II）限制系統評估直接抗原呈遞和交叉抗原呈遞。(2） 通過RT-PCR評估proteome profile和表面標誌物。(3）使用ELISA分析IL-12細胞因子分泌 。(4）通過功能測定評估對PAMP刺激的反應。
To decomplement FBS：
1.讓FBS瓶在4°C下完全解凍過夜。
2.將FBS瓶置於56°C的水浴中30分鐘。
Decomplemented FBS可以在-20°C下長期保存。避免頻繁的凍融循環。每2-3天更換一次完整的媒體。不要讓介質顏色變為黃色。
解凍T0528：
1.在37℃水浴中解凍小瓶，直到只有一小塊冰塊。
2.將細胞轉移到含有5ml pre-warmed complete media 之15ml管中。
3.將細胞以290xg離心5分鐘。
4.小心丟棄上清液，不要打擾細胞沉澱，輕輕地上下移液，將細胞重新懸浮在1ml完全培養基中。
5.將細胞培養在150,000-200,000個細胞/ cm2。
To subculture T0528:
1.當細胞70-90％ confluency時，建議繼代培養。
- Aspirate old media。懸浮液中的一些細胞仍然是活細胞。或者，也可以收集含有懸浮細胞的上清液並離心（Skip to Step 6 in protocol）。
3.加入1：1比例的1X無菌PBS和0.25％胰蛋白酶-EDTA（TM051）。 4.在室溫下孵育細胞3-5分鐘並攪拌培養容器直至90％的細胞脫落。
- 中和胰蛋白酶:添加等量之trypsin + PBS。
6.收集細胞並以290xg離心5分鐘。
7.丟棄上清液，輕輕地上下移液，將細胞重新懸浮在完全培養基中。
8.建議split ratio比不超過1：3。
可以使用PolyIC（5μg/ ml），CpG（2mM）或LPS（5μg/ ml）進行刺激。這些細胞對FBS的要求特別敏感，因此，建議使用相同的批次培養能夠支持其培養的最佳結果的細胞。我們還建議在完整培養基中添加額外的1％Hepes以促進細胞繁殖。
凍結T0528：
Complete growth medium with decomplemented FBS to a final concentration of 50% from PAN Biotech (P40-37500) or from Nucleus Biologics (FBS1824-001) and 5% DMSO.
儲存溫度：液氮氣相。重要提示：此細胞係對FBS批次非常敏感。我們強烈建議最終用戶使用從PAN biotech或Nucleus Biologics 之FBS。
產品資料請按這PriCoat™ T25 Flasks | type I collagen coating | I 型膠原(type I collagen) | Applied Cell Extracellular Matrix | Prigrow III Medium初代細胞培養液
HOT!! 黴漿菌PCR偵測 | DAPI染核 | 細胞內黴漿菌去除劑 | 水浴槽抑菌劑 | 噴霧式去黴劑 等系列商品
Abmgood不朽化系列商品 (immortalized reagenet) Ready-to-use
Abmgood公司於人類與老鼠不朽之細胞株上，具有幾十年的實驗經驗；提供一系列不朽 (immortalized)化之細胞株、及不朽化之試劑商品。ready-to-use定量好之retrovirus、lentiviru、 adenovirus，可直接加於細胞中進行感染表現；病毒液包括有SV40重組病毒、EBV重組病毒、hTERT病毒液、Myc基因病毒液、p53基因病毒液、Rb基因病毒液、Ras基因病毒液。提供106及109兩種包裝力價之病毒液；亦提供一系列病毒力價濃縮與定量試劑商品。
細胞不朽化的工具中，SV40 T antigen是最簡單且最常用來造成不朽化細胞生成的方法。多數的病毒基因和抑癌基因（p53、Rb等）的不活化相關，會誘導細胞處於replicative senescence的階段。目前也有研究顯示被感染的細胞，SV40 T anbtigen會誘導端粒酶（Telomerase）的活性。與端粒（telomere）長度相關的Telomerase Reverse Transcriptase protein (TERT)是一種不朽細胞的研究應用。平常細胞中，hTERT是處於不活化態，必要時會進行活化保持telomere的長度，避免細胞發生replicative senescence的現象。某些細胞hTERT 過度表現（over-expression）對於誘發細胞不朽化是無效的（如初代上皮細胞），反而會造成細胞死亡；同時表現hTERT catalytic subunit以及p53或RB siRNA在人類初代卵巢上皮細胞會造成細胞不朽化。過度表現Ras或Myc T58A mutants也有初代細胞不朽化的現象產生。
引用文獻
- Marraco, SA et al. “Novel Murine Dendritic Cell Lines: A Powerful Auxiliary Tool for Dendritic Cell Research” Front Immunol 3:331 (2012). DOI: 10.3389/fimmu.2012.00331.
Abstract
Research in vitro facilitates discovery, screening, and pilot experiments, often preceding research in vivo. Several technical difficulties render Dendritic Cell (DC) research particularly challenging, including the low frequency of DC in vivo, thorough isolation requirements, and the vulnerability of DC ex vivo. Critically, there is not as yet a widely accepted human or murine DC line and in vitro systems of DC research are limited. In this study, we report the generation of new murine DC lines, named MutuDC, originating from cultures of splenic CD8α conventional DC (cDC) tumors. By direct comparison to normal WT splenic cDC subsets, we describe the phenotypic and functional features of the MutuDC lines and show that they have retained all the major features of their natural counterpart in vivo, the splenic CD8α cDC. These features include expression of surface markers Clec9A, DEC205, and CD24, positive response to TLR3 and TLR9 but not TLR7 stimuli, secretion of cytokines, and chemokines upon activation, as well as cross-presentation capacity. In addition to the close resemblance to normal splenic CD8α cDC, a major advantage is the ease of derivation and maintenance of the MutuDC lines, using standard culture medium and conditions, importantly without adding supplementary growth factors or maturation-inducing stimuli to the medium. Furthermore, genetically modified MutuDC lines have been successfully obtained either by lentiviral transduction or by culture of DC tumors originating from genetically modified mice. In view of the current lack of stable and functional DC lines, these novel murine DC lines have the potential to serve as an important auxiliary tool for DC research.