【IgY抗體純化試劑盒 ( IgY EggsPress Purification Kit )】IK 500/IK 2000/ IK 4000

Gallus Immunotech IgY EggsPress Purification Kit

IgY EggsPress 純化試劑盒 ( IgY EggsPress Purification Kit ) 能夠幫助研究人員快速且有效率地從免疫雞的蛋中純化雞抗體 (IgY)，且不會損失抗體活性。選擇雞來生產多克隆抗體有很多優點。使用母雞產蛋的缺點是難以從蛋黃的脂質環境中純化IgY。IgY抗體純化試劑盒 ( IgY EggsPress Purification Kit ) 可以有效解決這個問題。此試劑盒以兩步驟沉澱法－第一步去除脂質，第二步沉澱IgY－即可獲得純度達90%的IgY組分。預計每毫升蛋黃可純化出4至7毫克IgY。只需按照抗體純化試劑盒說明書操作即可。整個過程大約需要4小時，但實際操作時間僅需30分鐘。獲得 IgY 後，您可以像處理其他免疫球蛋白一樣處理它。您可能需要對抗體進行標記或親和純化。操作步驟與處理其他抗體組分相同。請記住，IgY 不與蛋白 A、蛋白 G 或蛋白 L 結合！您可能希望將 IgY 用作 ELISA 檢測、Western blot 或免疫染色實驗中的一抗。我們提供多種標記的二抗（抗雞免疫球蛋白）和正常（免疫前）IgY。

優點：

提供快速有效的方法純化雞蛋中的雞抗體chicken antibodies (IgY)。套組不含PEG，將干擾降至最低。
Gallus immunotech使用兩步驟沉澱（移除脂質／沉澱IgY），解決不易從蛋黃的脂質環境純化IgY的問題。
IgY EggsPress Purification Kit可提供純度90%以上的IgY片段，最高每毫升（ml）蛋黃可純化出4－7mg IgY。
4小時內純化完成。實際操作時間僅30分鐘。

使用雞抗體的好處：

雞非哺乳類動物，和哺乳類抗原有高親和性，且避免和哺乳類抗原產生cross-reaction。
為最人道的多株抗體產製方法。只需從雞蛋萃取蛋白，取樣方便，不傷害動物。
每隻雞可以產生的抗體量約3 g IgY／月，是兔子的10-20倍多。且產製速度比起兔子快上許多，最快25天即可取得高力價（titer）抗體。
雞IgY的Fc region和哺乳類IgG的不同：
- 可降低對哺乳動物的背景值。
- 不會活化哺乳類補補體系統。
- 不會與哺乳類Fc recentors結合。
- 無法和常規的protein A（Staphylococcus aureus）、protein G（Streptococcus sp.）、或protein L（Peptostreptococcus magnus）等免疫球蛋白－蛋白結合反應

由於IgY取得方便，雞蛋可以儲存較長的時間，並可純化取得較佳的titer。
相對於兔子，雞的開銷較便宜。
IgY有以下數種和哺乳類IgG類似的特徵：
- 為二價體。
- 可由papain分解成divalent Fab fragment。
- 適用酵素、生物素（biotin）、金粒子等標定物。

貨號	商品名稱: IgY抗體純化 (包裝)
IK 500	EggsPress IgY Purification Kit (5 yolks)
IK 2000	EggsPress IgY Purification Kit (20 yolks)
IK 4000	EggsPress IgY Purification Kit (40 yolks)
IK 8000	EggsPress IgY Purification Kit (80 yolks)
RA500	Reagent A (Delipidation) (5 yolks)
RA2000	Reagent A (Delipidation) (20 yolks)
RA4000	Reagent A (Delipidation) (40 yolks)
RA8000	Reagent A (Delipidation) (80 yolks)
RB500	Reagent B (IgY Precipitation) (5 yolks)

操作手冊：

使用前，試劑 A 和 B 以及雞蛋必須在 4°C 的溫度下。
用蛋黃分離器將冷藏的 蛋黃與蛋白分離。用蒸餾水沖洗蛋黃，然後在紙巾上滾動以去除殘留的蛋白。用巴斯德吸管刺穿蛋黃膜，讓蛋黃流入已秤重的燒杯中。記錄蛋黃的重量。假設1毫升蛋黃等於1克。
將5倍體積的冷試劑A緩慢加入蛋黃中，同時輕輕持續攪拌，直到充分混合。避免起泡。
將稀釋後的蛋黃液在 4°C 下靜置至少 2 小時，最多 24 小時。 加入離心管前輕輕混合。 在 4°C 下以 4000 xg（或更高）的轉速離心 15 分鐘。轉速越低，離心時間越長。
將上清液收集到量筒中。上清液應為無色透明狀。如果存在顆粒物，則應重複離心步驟，必要時進行過濾。測量體積。
將上清液轉移至燒杯中，加入等體積的冷試劑B，同時用攪拌子攪拌。持續攪拌2分鐘，然後將懸浮液在低溫下靜置1小時。
在 4°C 下以 4000 xg（或更高）的離心力離心 15 分鐘，然後棄去上清液。如果離心速度較低，則需要更長的離心時間。
將沉澱物溶解於等體積的PBS緩衝液中，並與原蛋黃體積相等，然後過濾除菌。 IgY濃度應在4～7 mg/ml之間，純度為90%或更高。
將 IgY 儲存在冰箱中一年（或更長時間）也不會失去活性。