黃麴毒素B1ELISA免疫測試套組 | 貨號W81110

INTENTED USE

黃麴毒素B1是由黃麴黴菌屬的黃曲黴和寄生曲黴等產生的次級代謝產物，主要污染玉米、花生、堅果等。天然污染的黃麴黴毒素以AFB1為主，AFB1具有極強的急性毒性和致癌性，肝臟是其主要的靶器官。本試劑盒採用競爭型ELISA方法，則能快速、準確地檢測穀物 (grains)、飼料(feed)中的黃麴毒素B1(Aflatoxin B1)。Aflatoxin ELISA is a direct method competitive enzyme-linked

immunosorbent assay for the quantitative detect the presence of Aflatoxin B1 in samples of grains and feed.

原理-PRINCIPLE OF THE ASSAY

　　Aflatoxin B1 ELISA kit 試劑盒採用競爭型ELISA方法 (Competitive enzyme-linked immunoassay)。樣品中的游離黃麴毒素B1與酶標記的黃麴毒素B1競爭結合酶標板微孔中固相化的黃麴毒素B1特異性抗體，通過洗滌洗掉未結合的酶標記黃麴毒素B1，再通過酶的專一性顯色劑顯色根據顯色的深淺來判斷樣品中黃麴毒素B1。根據競爭性原理，如果樣品中的游離黃麴毒素B1量少，則酶標記的黃麴毒素B1結合的多，顯色深，反之，則顯色淺。檢測時設置標準曲線，通過標準曲線測定樣品中黃麴毒素B1的含量。ELISA 測量波段(450 nm) 。

產品規格-Specifications

Aflatoxin ELISA has lower price but nearly the same quality compared to that made by Europea or USA.

Cross-reactivity: Aflatoxin B1  100%

Aflatoxin B1                 100%                              Aflatoxin B2                 15%

Aflatoxin G1                32%                                 Aflatoxin G2                3%       

產品內容物-KIT COMPONENT

           1 X Microtiter plate (8 microwells X 12 removable strips) precoated with anti-Aflatoxin B1 antibodies

           6 X Aflatoxin B1 standard solutions (1 mL each):0 ng/ml、0.3 ng/ml、0 .9ng/ml、2.7ng/ml、8.1 ng/ml、24.3ng/ml

          1 X Enzyme-linked conjugate (6 mL)

           1 X Washing buffer concentrate (10 X , 50 mL)

          1 X Substrate A: Carbamide Peroxide (6 mL)

           1 X Substrate B: TMB solution (6 mL)

          1 X Stopping solution, 2 M Sulphuric acid (6 mL)

           1X Product Manual

套組貯存條件-STORAGE

        未用完的微孔板應該密封乾燥保存

         該產品有效期為12個月

注意事項

使用試劑盒前請仔細閱讀說明書。

試劑盒使用前，將試劑恢復至室溫（20-25℃）。

不要使用過期試劑盒；不同批號試劑盒中的試劑不得混用；不同標準品、樣品所用吸頭不能混用；所有樣品溫度應恢復至室溫（20-25℃）。

避免所有試劑接觸皮膚；使用過的玻璃容器及黃麴黴毒素（AFB1）溶液最好用pH 7的高氯酸溶液（10%V/V）浸泡過夜。6.5  配製的70%甲醇水應密封保存或現配現用，以免甲醇濃度變化影響檢測結果。

試劑配製

洗滌工作液：用去離子水將濃縮洗滌液按1：9體積進行稀釋。例如：10ml洗滌工作液=1ml濃縮洗滌液+9ml去離子水

1%NaCl溶液：準確稱取1g NaCL固體溶解于去離子水中並定容至100ml；其它配製體積按此比例換算配製。

70%甲醇：用去離子水將100%甲醇（分析純）按7：3體積進行稀釋。例如：100ml70%甲醇=70ml 100%甲醇+30ml 去離子水

樣本提取液：準確稱取1g NaCL固體溶解於70%甲醇中並用70%甲醇定容至100ml，配製成為樣本提取液；其它配製體積按此比例換算配製。

樣品處理

取2g代表性樣品（飼料等大顆粒樣本需要粉碎），加20ml樣本提取液   ，強力振盪5分鐘，用 5000r/min離心10min；

取上清液用1%NaCl溶液對半稀釋，例如100µl上清液+100µl1%NaCL溶液，混勻待檢；

用NaOH或HCL將8.2中的上清液PH 至中性，取50µl用於實驗。

注意：稀釋倍數20；樣本檢測濃度超過試劑盒檢測範圍時，離心後取上清液先用樣本提取液稀釋到檢測範圍內，然後再用1%NaCl溶液進一步對半稀釋，混勻，準備進行分析檢驗。

實驗準備

預先進行編號，標記標準品和樣品的位置，推薦進行雙孔檢測；

使用前將所有試劑回升至室溫,取所需數量的微孔條，將多餘板條用試劑盒提供的自封袋重新密封同時排除裡面空氣，並立即放回2~8℃乾燥保存

分析步驟

加樣：在標準品孔中加入50µl各標準品溶液，在各樣品孔中加入50µl樣品溶液；

溫育：在所有孔中加入50µl的黃麴黴毒素B1酶標記物溶液，輕微晃動反應板使之徹底混勻，室溫下（20-25℃）溫育40min；

Washing：甩乾孔中液體，用洗滌工作液（300µl/孔）充分洗滌微孔板4-5次，最後一次應在吸水紙上拍打以完全除去孔中液體；

顯色：洗滌程式完成後，立即用微量移液器在每個微孔中先加入50µl底物液A，再加 50µl底物液B，輕微晃動反應板使之徹底混勻，室溫下（20-25℃）溫育15min；

讀值：每孔中加入50µl終止液，混勻，在450nm下檢測吸光度值，結果在5min內讀取。

結果計算

本試劑盒推薦配套使用快靈log/logit計算程式對檢測結果進行定量換算。

試劑盒性能參數

本試劑盒檢測下限為1.0 ng/ml

B0吸光度最佳值應大於0.8，小於0.8則認為變質

試劑盒吸光度板內誤差小於8％，板間誤差小於15％

LIMITATION

Quicking Aflatoxin B1 ELISA kit is used as a screening system. If a more accurate result is required,

other methods such as HPLC or GC/MS is suggested to give a confirmation.