非洲豬瘟病毒螢光PCR高敏檢測試劑盒-Real-time PCR Diagnostic Kit for African Swine Fever

Real-time PCR Diagnostic Kit for African Swine Fever

【作用與用途】

用於豬脾臟、淋巴結、肉品、血液及血液製品中非洲豬瘟病毒核酸的檢測。
高敏試劑盒，顧名思義即高靈敏度擴增試劑盒，該試劑盒比常規試劑盒的靈敏度至少提高10倍以上，可檢測低於400copies/ml濃度的樣本，可在第一時間檢測到極低濃度的病毒，從而讓客戶第一時間採取措施。適用場景：各級養殖場/實驗室非瘟防控的精准篩查；引種/交易/流通環節的精准篩查。
【用法與判定】
1 用法
1.1 樣品處理下列樣品處理後置60℃滅活30 分鐘。
1.1.1 組織樣本取100～200mg 待檢組織樣本（脾臟、淋巴結、肉類），用研缽充分研磨後，加入PBS（pH
值7.2）1ml，混勻；或加入1ml PBS（pH 值7.2）及磁珠後以組織勻漿儀勻漿處理。再以10000r/min 離心
3 分鐘，吸取上清200μl，置於1.5ml 離心管中，編號備用。
1.1.2 血液採集抗凝血，吸取200μl，置1.5ml 離心管中，編號備用。1.1.3 血液制品取100～200mg 待检血液制品（如血浆蛋白粉），置于1.5ml 离心管中，加入PBS（pH
值7.2）1ml，充分混匀震荡后，以10000r/min 离心3 分钟，吸取上清200μl，置于1.5ml 离心管中，编号备
用。
1.2 样品存放采集或处理好的样品在2～8℃保存应不超过24 小时；若需长期保存，须放置-70℃以下
冰箱，并应避免反复冻融。
1.3 DNA 提取用商品化试剂盒按其说明书，对处理好的样品提取DNA。
1.4 荧光PCR 反应体系的配制取出试剂盒中的各组分，置室温（15～25℃）融化后瞬时离心，备用。每
次检验设阴、阳性对照。设待检样品、阳性对照和阴性对照的样品总份数为n，按如下反应体系配制：
將以上配製的反應系統充分混合後，分裝至反應管中，每管 17μl。分別取 DNA樣本 3μl 加入對應反應管中，蓋緊管蓋後瞬時離心

1.5 螢光 PCR 反應條件
第一階段：95℃ 20秒；
第二階段：95℃ 1 秒、60℃ 20 秒，共 40 個擴增循環。
對於 ABI螢光 PCR儀，選擇 FAM通道讀取檢測結果，淬滅基團選擇“MGB”

對於其他品牌的螢光PCR 儀，選定FAM 通道讀取檢測結果，淬滅基團選擇“None”。

2 試驗成立條件陽性對照Ct 值＜35 並出現典型的擴增曲線，陰性對照無Ct 值並且無特異性擴增曲線，

則判為試驗成立。

3 判定待檢樣品Ct 值≤36 並出現典型的擴增曲線，判為陽性；待檢樣品無Ct 值並且無特異性擴增曲

線，判為陰性；36＜Ct 值≤40 並出現典型的擴增曲線，判為疑似。對疑似樣品，範本量加倍（即6μl DNA）

進行複檢（無菌無核酸酶水減至1.5μl，其它體系不變），Ct 值≤40 並出現典型的擴增曲線判為陽性，無Ct

值並且無特異性擴增曲線則判為陰性。

【注意事項】

（1）試劑盒應在-20℃以下保存和運輸。

（2）本試劑盒僅用於體外檢測使用，操作人員必須經過培訓，試劑盒使用前請仔細閱讀說明書全文。

（3）不要使用過期組分或者不同批次組分混合使用。

（4）使用時儘量避免反復凍融，如凍融，應不超過3 次。

（5）樣品採集和處理過程應戴一次性手套，並及時更換，樣品間嚴禁交叉污染。

（6）螢光PCR 實驗嚴格分區操作，各區應有專用的手套、移液器等，不得交叉使用，避免污染；工作人員

應遵循單方向工作原則，各工作區相對隔離。

（7）進行螢光PCR 實驗的工作桌面及相關物品應定期用1%次氯酸鈉、75%酒精、1mol/L 鹽酸依次滅菌和消

毒，或定期用紫外燈滅菌和消毒。

（8）測試樣品時，應做好生物安全防護。

（9）試驗完畢後，使用過的試劑盒、樣品和試劑應進行無害化處理。

【規格】（1）10 份/盒（2）20 份/盒（3）50 份/盒

。