Endoglycosidase H簡稱Endo H，源自Streptomyces plicatus的內切醣苷酶H，由大腸桿菌重組表達，能夠專一切割β-1，4-糖苷鍵連接的高甘露糖型結構和某些雜合型糖蛋白，形成帶有一個N-乙醯葡糖胺的糖蛋白結構。切割後的蛋白仍具有生物活性，不影響其功能等後續研究。主要用於去除蛋白質的N糖基化。源自Streptomyces plicatus，大腸桿菌重組表現；在37℃條件下，1 h將10 μg變性的RNase B中除去超過95%的碳水化合物所需的酵素量定義為一個酵素活單位；SDS-PAGE檢測純度＞95%；內生性核酸殘留量＜1 pg/μL（qPCR檢測）；500 U/μL； 75℃加熱10 min即可失去活性； 酵素存儲buffer20 mM Tris-HCl，50 mM NaCl，5 mM EDTA，50% Glycerol，pH 7.5；10х Denaturing Buffer： 5% SDS，400 mM DTT；10х Native Buffer： 400 mM sodium acetate，pH 6.0。

圖1. 用Endo H處理底物RNase B去糖基化效果圖。底物RNase B變性處理後，取10 μg分別加入不同酵素量的Endo H（0、10、1、0.5、0.1 U），37℃孵育1 h後全部PAGE電泳檢測。

來源：源自Streptomyces plicatus，大腸桿菌重組表現；

酵素定義：在37℃條件下，1 h將10 μg變性的RNase B中除去超過95%的碳水化合物所需的酵素量定義為一個酵素活單位；

純度及濃度： SDS-PAGE檢測純度＞95%；內生性核酸殘留量＜1 pg/μL（qPCR檢測）；500 U/μL；

失活或抑制： 75℃加熱10 min即可失去活性；

酵素存儲buffer： 20 mM Tris-HCl，50 mM NaCl，5 mM EDTA，50% Glycerol，pH 7.5；

10х Denaturing Buffer： 5% SDS，400 mM DTT；

10х Native Buffer： 400 mM sodium acetate，pH 6.0；

操作步驟

1. 變性條件下蛋白質去醣基化：

在1-20 μg蛋白質樣本中加入1 μL 10х Denaturing Buffer和dH ₂ O至10 μL反應體系，體系在100℃中孵育10 min。再加入2 μL 10х Native Buffer、1-5 μL Endo H和適量dH ₂ O至20 μL反應體系，37℃孵育1 h。

2. 非變性條件下蛋白質去醣基化：

在1-20 μg蛋白質樣本中加入2 μL 10х Native Buffer、2-5 μL Endo H和適量dH ₂ O至20 μL反應體系，37℃孵育4-24 h。（非變性條件下蛋白質去糖基化需要更長的反應時間或更多的酵素）

注意事項

1. SDS不會影響酵素的活性。

2. 評估蛋白質去糖基化的程度，最簡單的方法是透過SDS-PAGE凝膠電泳檢測。

3. 酵素的取用都應放在冰盒內，使用完畢後立即存放於-20℃。

4. 為了您的安全和健康，請穿著實驗服並戴上一次性手套操作。

操作步驟

1. 變性條件下蛋白質去醣糖基化：

在1-20 μg蛋白質樣本中加入1 μL 10х Denaturing Buffer和dH ₂ O至10 μL反應體系，體系在100℃中孵育10 min。再加入2 μL 10х Native Buffer、2 μL 10% NP-40、1 μL PNGase F和適量dH ₂ O至20 μL反應體系，37℃孵育1 h。（註：PNGase F的活性會收到SDS抑制，因此在變性條件下必須加入NP-40）

2. 非變性條件下蛋白質去醣基化：

在1-20 μg蛋白質樣本中加入2 μL 10х Native Buffer、2-5 μL PNGase F和適量dH ₂ O至20 μL反應體系，37℃孵育4-24 h。（非變性條件下蛋白質去糖基化需要更長的反應時間或更多的酵素）

注意事項

1. PNGase F的活性會收到SDS抑制，因此在變性條件下必須加入NP-40。

2. 評估蛋白質去醣基化的程度，最簡單的方法是透過SDS-PAGE凝膠電泳檢測。

3. 酵素的取用都應放在冰盒內，使用完畢後立即存放於-20℃。

4. 為了您的安全和健康，請穿著實驗服並戴上一次性手套操作。