蛋白酶 K (Proteinase K) | CAS#39450-01-6 APExBIO  貨號K1037

蛋白酶 K (Proteinase K)是一種廣譜(broad spectrum) 絲氨酸蛋白酶(serine protease)，在 DNA 提取方案中用於消化污染蛋白質(contaminating proteins)，尤其是 DNA 酶(DNases)。該酶裂解蛋白質中與脂肪族(aliphatic)和芳香族氨基酸殘基(aromatic amino acid residues)的羧基相鄰的肽鍵(peptide bonds)。蛋白酶 K(Proteinase K) 的主要應用是在 DNA 和 RNA 提取(RNA extraction)中的應用。在大多數核酸提取 (nucleic acid extraction)方案中，蛋白酶 K (Proteinase K)被添加到組織(tissue)或裂解物(the lysate)中，以確保在核酸提取過程中完全消化蛋白質，尤其是 DNase 和 RNase。消化蛋白質(digest proteins)的能力也使蛋白酶 K 可用於製備用於脈衝場凝膠電泳 (pulsed-field gel electrophoresis)、蛋白質指紋(protein fingerprinting)、蛋白酶足印(protease foot printing)、線粒體分離(mitochondrial isolation)、基因組 DNA (genomic DNA isolation)分離等的染色體 DNA(chromosomal DNA)。

蛋白酶K(Proteinase K) 產品是從畢赤酵母細胞(Pichia pastoris cells)中提取的，克隆了編碼Engyodontium album (Tritirachium album) 內溶蛋白酶的基因。它是一種高活性蛋白酶，常用於消化各種蛋白質和酶（包括核酸內切酶、核酸外切酶、DNase 或 RNase）。因此，它通常用於 DNA 製備而不損害分離 DNA 的完整性(integrity)。它在廣泛的條件下具有卓越的性能：pH、緩衝液(buffer)、去污劑（如 SDS）、螯合劑（如 EDTA）和溫度(temperature)。蛋白酶 K 優先水解與疏水氨基酸，脂肪族(aliphatic)、芳香族氨基酸殘基(aromatic amino acid residues)的羧基相鄰的肽鍵。

 

除了基因組(genome)的分離外，它還可以用於檢測酶定位(localization)或從DNA中去除酶以提高克隆效率(cloning efficiency)。蛋白酶 K (proteinase K)的合適工作濃度始終在 0.05 至 1 mg/mL 的範圍內。添加的蛋白酶 K 的濃度取決於被消化的組織。對於大多數組織來說，200 µg/ml 的工作濃度就足夠了。最終用戶需要針對該樣品類型優化蛋白酶 K 的最佳工作濃度。

酶的活性可以被 0.2 到 1% SDS 或 1-4 mol 尿素刺激。它被鈣（1-5mM）激活，雖然鈣離子不影響酶的活性，但它有助於熱穩定性並保護蛋白酶免於自溶(autolysis)。蛋白酶 K(proteinase K) 有兩個 Ca2+ 結合位點(substrate binding site)，靠近活性中心，但不直接參與催化機制。因此鈣離子對蛋白酶K的底物結合位點具有調節作用。該酶被DIFP或PMSF滅活。然而，它不受 EDTA、碘乙酸(iodoacetic acid)、胰蛋白酶特異性抑製劑(trypsin-specific inhibitor) TLCK、胰凝乳蛋白酶特異性抑制劑 TPCK(trypsin-specific inhibitor, TPCK) 和對氯汞苯甲酸鹽(p-chloromercuribenzoate)的抑制。建議最佳 pH 值為 7.5 至 8.0，最佳溫度為 50 至 55°C。溫度高於 65°C 時會發生快速變性。可以將其在 95°C 下保持 10 分鐘作為熱滅活(heat inactivation)。

Cas No.	39450-01-6	SDF
Concentration	>600 U/mL (approximately 20 mg/mL)
Formula		M.Wt	29.3 kDa
Solubility	Soluble in 20 mM Tris-HCl, 1 mM CaCl2, 50% Glycerol, pH 7.4	Storage	Store at -20°C
Stability	pH range:4.0 to 12.5, temperature range: 25°C to 65°C.
General tips	Apexbio guarantees optimal performance of this product for 18 months after date of delivery under the appropriate temperature and condition.
Shipping Condition	Evaluation sample solution: ship with blue ice

 

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