【競爭型免疫分析套組】Competitive Inhibition ELISA-Cloud clone

競爭抑制ELISA法是指將特異性抗體吸附於固相載體，隨後加入待測抗原（標準品和样本）和一定量的生物素標記的抗原（檢測液A），使二者競爭與固相抗體結合，incubator後經洗滌去掉未結合物，然後加入HRP-Avidin，經過溫度和徹底Wash後加入底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成最終的黃色。待測標本濃度越高，標記抗原和抗體的結合就越受到抑制，顯色愈淺。顯色的深淺與酶量呈正相關，而與樣品中待測物質含量呈負相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。由於生物大分子可標記多個生物素，而生物素可以特異性結合酶標親和素，放大檢測信號，提高免疫分析敏感性。小分子抗原(Antigen)或半抗原因僅有單個抗原表位，缺乏雙抗體夾心法所需的基本條件。 – 具有2個或2個以上表位，所以對其常用競爭法進行測定其原理是將待檢抗原和酶標抗原與相應固相抗體競爭結合，標本中抗原越多，與固相抗體結合的酶標抗原越少，與底物反應生成的顏色越淺，因此根據顏色深淺可定量測定。原理圖如下：

當抗原(Antigen)片段太小，找不到相呼應的抗體對時，會利用一支抗體的競爭型方式做偵測。眾所周知，對於具有多個表位的抗原而言，雙夾心ELISA（Double Sandwich ELISA）可應用於目標抗原或抗體的定量檢測。而對於小分子抗原或半抗原，因缺 乏可作夾心法的兩個以上的結合位點，因此不能用雙抗體夾心法進行測定。此時， 可以採用競爭抑制法模式來檢測其中靶分子的含量。競爭抑制 ELISA 又叫Blocking ELISA，其主要原理是將標本中的抗原和一定量的酶標抗原競爭與固相抗體結合。 標本中抗原量含量愈多，結合在固相上的酶標抗原愈少，最後的顯色也愈淺，也就 是說，最終顯色的結果與待檢抗原或抗體的干擾程度成負相關。小分子激素、藥物 等 ELISA 測定多用此法。

通常意義上來說，小分子是指分子量很小的化合物，一般分子量小於 1000 道爾頓（Dalton，Da）。在生物學領域，常見的小分子包括：多肽、多糖、氨基 酸、核苷酸等；其中也包括食品安全中涉及的“瘦肉精”、“三聚氰胺”等； 以及醫學檢測中的激素等。由於小分子通常化學組分單一，化學結構簡單且分子量小，所以不具備免疫原的基本化學特性。因此，小分子直接免疫動物是不能激發免疫應答而獲得 特異性抗體的，常用的免疫學檢測方法也很難對其進行定量檢測。現有的針對 小分子定量檢測的方法主要為高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC），但是該方法對儀器設備及樣本性質要求高，檢測耗 時較長，因此在一定程度上限制了小分子檢測的發展。

正由於市場需求與現有檢測方法的限制性不能達到統一，所以針對小分子 的檢測，Cloud clone基於特有的小分子結構改造及偶聯技術，研發了一系列的 ELISA 檢測試劑盒產品。我們首先通過對小分子結構進行分析，然後針對性地對其進 行修飾並與特定的蛋白或多糖載體偶聯，以獲取具有免疫原性的完全抗原，此 後再用該抗原免疫動物製備並篩選特異性抗體。由於小分子結構簡單，分子量 小，不具有兩個抗原識別位點，因此不能被兩種抗體同時識別，所以在建立 ELISA 方法的時候很難使用雙抗體夾心法。Cloud clone在獲得小分子偶聯物和特異性 抗體後，選用了競爭抑制法來建立 ELISA 的檢測。ELISA 檢測法每次實驗耗時約 2.5 小時，如果每次實驗使用一個 96 孔酶標 板，除去標準曲線使用的 6 個孔，剩餘 90 孔均可用於樣本檢測，所以對於每個樣本的檢測僅需要不到 2 分鐘。對小分子的定量檢測，ELISA 檢測法與常用的 HPLC 檢測比較，其優勢見下表。

表 1. HPLC 與 ELISA 定量檢測小分子對比

項目	HPLC	ELISA
樣本體積	10-100ul	50ul
樣本性質	高	中
實驗時間/樣本	30min	< 2min
樣本數量	每管 1 個樣本	每塊板 90 個樣本
儀器價格	高	中
檢測價格	單個樣品所需費用高	單個樣品所需費用低

Cloud clone公司研發的小分子類檢測試劑盒產品涉及多個學科，包含：醫學激素類 產品，例如：雌酮（CEB003Ge）、睾酮（CEA458Ge）等；生物學氨基酸、維 生素類產品，例如：精氨酸（CEB938Ge）、維生素 B1（CED053Ge）等，微生 物學相關產品，例如：脂多糖（CEB526Ge）等；植物類相關產品，例如：脫落 酸（CEB218Ge）等。

競爭抑制ELISA法套組內容

Reagents	Quantity	Reagents	Quantity
Pre-coated, ready to use 96-well strip plate	1	Plate sealer for 96 wells	4
Standard	2	Standard Diluent	1×20mL
Detection Reagent A	1×120µL	Assay Diluent A	1×12mL
Detection Reagent B	1×120µL	Assay Diluent B	1×12mL
TMB Substrate	1×9mL	Stop Solution	1×6mL
Wash Buffer (30 × concentrate)	1×20mL	Instruction manual	1

  丙二醛（MDA）酶聯免疫吸附測定試劑盒 |貨號CEA597Ge

ELISA Kit for Malondialdehyde (MDA)

商品: 丙二醛（MDA）酶聯免疫吸附測定試劑盒| Competitive Inhibition貨號CEA597Ge，偵測的靈敏度24.69-2,000ng/mL、最低靈敏度9.15ng/mL。物種為Pan-species (General)。可應用於serum, plasma 及其它生物液體biological fluids等樣品之檢測。ELISA原理為利用抗體與抗原之間的高度專一性，做為定量標誌的方法；無論測量抗原或測量抗體都有很高的靈敏度跟專一性。Cloud-Clone corp提供高靈敏度之ELISA (酵素免疫分析套組/酶聯免疫吸附試驗法)，專門生產研究用檢測試劑的生技公司，於美國研發和生產，產品線包括ELISA Kit、CLIA Kit、Antibody及recombinant protein；ELISA產品系列超過6000種以上，物種齊全包括rat、mouse、rabbit、cavia、human、porcine、bovine、simian等多物種商品。品質保證。ELISA商品的型式多元， 提供三明治ELISA、競爭型ELISA、高靈敏度設計ELISA。

  晚期糖基化終產物（AGE）ELISA試劑盒 | 貨號CEB353Ge

ELISA Kit for Advanced Glycation End Product (AGE)

商品: 晚期糖基化終產物（AGE）ELISA試劑盒 (酶聯免疫吸附試驗法) | Competitive Inhibition貨號CEB353Ge，應用物種Pan-species (General)；偵測範圍98.8-8,000ng/mL , 最低靈敏度38.2ng/mL可應用於serum, plasma及生物樣品之檢測。
晚期糖基化終產物（AGE）檢測相關之抗體 | 蛋白質 | ELISA | CLIA產品

Catalog No.	Related products for research use of Pan-species (General) Organism species	Applications (RESEARCH USE ONLY!)
NPB353Ge01	Native Advanced Glycation End Product (AGE)	Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
APB353Ge01	Active Advanced Glycation End Product (AGE)	Cell culture; Activity Assays.
PAB353Ge01	Polyclonal Antibody to Advanced Glycation End Product (AGE)	WB; IHC; ICC; IP.
LAB353Ge71	Biotin-Linked Polyclonal Antibody to Advanced Glycation End Product (AGE)	WB; IHC; ICC.
LAB353Ge81	FITC-Linked Polyclonal Antibody to Advanced Glycation End Product (AGE)	WB; IHC; ICC; IF.
MAB353Ge21	Monoclonal Antibody to Advanced Glycation End Product (AGE)	WB; IHC; ICC; IP.
CEB353Ge	ELISA Kit for Advanced Glycation End Product (AGE)	Enzyme-linked immunosorbent assay for Antigen Detection.
KSB353Ge11	ELISA Kit DIY Materials for Advanced Glycation End Product (AGE)	Main materials for “Do It (ELISA Kit) Yourself”.

 皮質酮（Cort）檢測試劑盒 (酵素免疫吸附試驗法) | 貨號CEA540Ge

ELISA Kit for Corticosterone (Cort)

商品: 皮質酮（Cort）ELISA檢測試劑盒 (酶聯免疫吸附試驗法) | Competitive Inhibition貨號SEB710Hu，應用物種(General)；偵測範圍1.23-100ng/mL, 最低靈敏度0.51ng/mL.. 可應用於serum, plasma, urine and other biological fluids之樣品檢測。皮質酮（Cort）相關之抗體 | 蛋白質 | ELISA | CLIA產品

Catalog No.	Related products for research use of Pan-species (General) Organism species	Applications (RESEARCH USE ONLY!)
CPA540Ge11	BSA Conjugated Corticosterone (Cort)	Immunogen; SDS-PAGE; WB.
CPA540Ge21	OVA Conjugated Corticosterone (Cort)	Immunogen; SDS-PAGE; WB.
PAA540Ge01	Polyclonal Antibody to Corticosterone (Cort)	WB; IHC; ICC; IP.
LAA540Ge71	Biotin-Linked Polyclonal Antibody to Corticosterone (Cort)	WB; IHC; ICC.
LAA540Ge81	FITC-Linked Polyclonal Antibody to Corticosterone (Cort)	WB; IHC; ICC; IF.
MAA540Ge22	Monoclonal Antibody to Corticosterone (Cort)	WB; IHC; ICC; IP.
LAA540Ge72	Biotin-Linked Monoclonal Antibody to Corticosterone (Cort)	WB; IHC; ICC.
CEA540Ge	ELISA Kit for Corticosterone (Cort)	Enzyme-linked immunosorbent assay for Antigen Detection.
WEA540Ge	Wide-range ELISA Kit for Corticosterone (Cort)	Enzyme-linked immunosorbent assay for Antigen Detection.
CCA540Ge	CLIA Kit for Corticosterone (Cort)	Chemiluminescent immunoassay for Antigen Detection.
KSA540Ge11	ELISA Kit DIY Materials for Corticosterone (Cort)	Main materials for “Do It (ELISA Kit) Yourself”.