單核球細胞分離液原理-Lymphoprep Density Gradient Media

分離白血球最常見的技術是將血液與聚集(aggregates )紅血球的化合物混合，從而增加其沉澱速率(sedimentation rate)。白血球(leucocytes)的沉降僅受到輕微影響，當紅血球沉降時，可以從管的上部收集白血球。 Bøyum (1968) 使用 Metrizoate 和多醣的混合物開發了一種一步式離心技術，用於從室溫下保存長達 6 小時的抗凝血血液中分離淋巴細胞。Lymphoprep™可穩定保存 3 年(保持無菌並避光)。長時間暴露在陽光直射下會導致泛影酸鈉分子釋放碘。 Lymphoprep™ 應儲存於 +4 °C 至 +30 °C 下。

單核球細胞分離液 | Lymphoprep Density Gradient Media貨號PG-1858-6

Lymphoprep™ 單核球細胞分離液 (Lymphoprep Density Gradient Media, 貨號PG-185-6) 是一種即用型、無菌且經過內毒素測試的測試溶液，用於分離純淋巴細胞懸浮液(pure lymphocyte suspensions)。溶液含有以下濃度的 Sodium Diatrizoate和多醣(Polysaccharide)：

密度梯度離心 (Density gradient centrifugation) 是以一定介質在離心管內形成密度梯度，藉以分離細胞或胞器的實驗方式。Lymphoprep™ 為適用於分離人類血液淋巴球 (Lymphocytes) 及單核球 (Monocytes) 的理想介質，具備以下特點：

• 密度 1.077±0.001 g/ml，可取代他牌 Plus 或 PREMIUM 產品
• 操作方便，利用簡單的密度梯度離心方式半小時內即可完成細胞分離
• 具等滲透壓及適合的 pH，不對樣本造成破壞
• 低黏性、無毒性，符合 GMP 規範
• 價格具有高度競爭力

Lymphoprep™ 操作流程（見圖）

1. 將血液收集到含有抗凝血劑 (EDTA, heparin, ACD)的試管中或使用去纖維血液(defibrinated blood)。

2. 加入等體積 ( 1:1 稀釋 ) 的 0.9% NaCl 稀釋血液。

3. 小心地將 6 ml 稀釋血液置於 12–15 mm 離心管中的 3 ml Lymphoprep™ 上。或者，Lymphoprep™ 可以鋪在底層。再將 6 ml 稀釋後的血液樣本加至上層。
避免血液和分離液混合。蓋住管子以防止形成氣溶膠。

4. 在室溫（約 20 °C）下， 800 x g 離心 20 分鐘。如果血液保存時間超過2小時，請將離心時間增加至30分鐘。

5. 離心後，單核細胞在樣本/介質界面處形成明顯的條帶，如圖所示。最好使用巴斯德移液管從界面上去除細胞，而不去除上層。

6. 以 0.9% NaCl 或培養基稀釋收穫的級分以降低溶液密度，並以 250 x g 離心 10 分鐘沉澱細胞。

純度和活性(PURITY AND VIABILITY)

已發現所描述的方法快速、簡單且可靠，並且對來自大多數正常個體和患者的血液樣本給出了優異的結果。該技術還可用於製備用於混合淋巴細胞培養測試的淋巴細胞懸浮液。紅血球淋巴球懸浮液中的污染通常佔總細胞數的 1-5%。在強烈的免疫抑制治療期間，一些未成熟的粒細胞可能會跟隨淋巴細胞。當使用肝素化血液時，必須移除大部分血小板，以避免細胞毒性測試中的抑制。所描述的洗滌程序通常就足夠了。