商品: Hydroxyproline Colorimetric Assay Kit羥脯氨酸呈色分析套組 (abcam ab222941)

產品規格: 羥脯氨酸呈色分析套組 貨號K555 | 100個分析

Hydroxyproline (4-hydroxyproline) 羥脯氨酸（4-羥基脯氨酸）是常見的非蛋白生成氨基酸。它僅存在於哺乳動物的膠原和彈性蛋白中，但存在於植物中的許多其它蛋白質中。羥脯氨酸僅存在翻譯後修飾肽鏈中，脯氨酸羥化酶非游離的羥基化脯氨酸。組織水解產物中的Hydroxyproline羥脯氨酸，為測量collagen膠原或gelatin明膠量的指標。多種疾病狀態影響膠原蛋白轉變，並可導致血清或尿羥脯氨酸升高。這種病症的範圍從腫瘤、炎症、腎或骨疾病到內分泌和自身免疫性疾病。 BioVision的羥脯氨酸測定試劑盒K555-100，設計用於測量組織或蛋白/肽水解產物中的羥脯氨酸。它可用於測量來自其他生物樣品如血清或尿液的羥脯氨酸（如果它們已經經歷了之前的純化過程）;方法容易、方便，在560nm處具有最大吸光度的色原體，該測定範圍0.1-2μg。

產品問與答尿液樣品的純化

100μl血清/尿中，加入100μl濃鹽酸。 HCl在壓力密封的特氟隆蓋瓶中並在120℃水解3小時。加入5mg活性炭Norit或活性炭Darco（Sigma Cat＃97876或242276）混合。以12000g離心2分鐘。將10ul上清液轉移至96孔板中，在真空下蒸發至乾。繼續操作手冊步驟3。

產品問與答樣品處理與保存

樣品用酸消化/水解以從膠原計算羥脯氨酸。標準品是羥丙基甲基纖維素，因此不需要HCL /蒸煮處理。此外，標準品不是真空乾燥的，因為其不含HCl-在進行其它試劑之前，將樣品乾燥以除去HCl。手冊中，要在真空下乾燥板。若沒這方面設備，可以在60℃的烤箱中乾燥板，確保擺脫HCl。空氣乾燥需要很長時間，不推薦。持水解的裂解物或乾燥的96孔板在-80攝氏度，供以後使用。請將裂解物等分，並在儲存前密封板。樣品製備部分中的反應時間，120.C進行少於3小時，否則水解將不能有效完成。可以將水解O / N繼續第二天，或水解3小時並凍結水解sup 於-80℃，以備使用。細胞若燒焦的外觀不影響實驗。預期當細胞/組織受到高溫處理3小時時，它們會產生燒焦的外觀。在進行下一步之前，讓這種黑色物質作為碎屑沉澱（如果需要，給管子輕輕旋轉）。然後僅取上清液用於下一步蒸發。

試劑盒可以用於像細菌，植物，果蠅，酵母等樣品；K555羥脯氨酸呈色分析套組，優化與哺乳動物樣品的試劑盒。然而，理論上這些試劑盒應與來自多個物種/來源的樣品一起使用。由於最佳條件取決於樣品類型，因此必須調整方案以適應樣品以獲得有效的結果。新鮮樣品總是優於冷凍樣品。然而，也可以使用冷凍樣品，條件是它們在分離後立即冷凍，不是多次冷凍解凍（為此我們建議在冷凍前, 分裝多管使用)。