Caspase-8 IETD-R110 螢光和比色測定試劑盒 | Biotium 貨號30008-2

Caspase-8 IETD-R110 Fluorometric and Colorimetric Assay Kit

Figure 1. Two-step cleavage of R110-based substrates by peptidases to release green fluorescent R110 dye. R represents the peptide substrate (DEVD for Caspase-3 substrate)

Caspase-8 是 CD95/Fas 凋亡通路中最上游的半胱天冬酶，被 CD95/Fas 和 TNF 的信號通路激活。螢光和顯色底物 (Ac-IETD)2-R110 包含兩個 IETD 四肽，並在兩個連續步驟中被 caspase-8 完全水解。第一個 IETD 肽的裂解產生單肽 Ac-IETD-R110 中間體，其吸收和發射波長與 R110（羅丹明 110）（Ex/Em= 496/520 nm）相似，但只有約 10%後者的螢光。第二個 IETD 肽的水解釋放染料 R110，導致螢光顯著增加。雖然最終產品的螢光檢測由於靈敏度高而成為首選，但也可以通過吸光度進行檢測。事實上，R110 的消光係數比對硝基苯胺 (pNA) 高 10 倍，對硝基苯胺 (pNA) 是一種常用於顯色底物的染料，這使得基於 R110 的底物比基於 pNA 的底物更加敏感，即使通過比色檢測也是如此。該檢測試劑盒包括 Ac-IETD-CHO，它是一種 caspase-8 抑製劑，可用作陰性對照。試劑盒中還提供了 R110，用於生成標準曲線，可用於定量 caspase-8 活性。

雖然與其他底物序列相比，caspase-8 優先切割共有序列 IETD，但其他 caspase（如 caspase-3）也可以有效切割 IETD。重疊的半胱天冬酶底物識別限制了半胱天冬酶底物肽在區分細胞裂解物中不同半胱天冬酶活性方面的用途。Caspase-8 螢光和比色測定試劑盒提供了一個簡單的測定係統，可通過哺乳動物細胞中的螢光或吸光度快速、高度靈敏地檢測 caspase-8 活性。 Biotium 還提供 Caspase-IETD-R110 螢光 HTS 檢測試劑盒 (30012)，這是一種用於高通量篩選 (HTS) 的單步螢光檢測。

1. Neurochem Res (2009) Aug;34(8):1410-6. doi: 10.1007/s11064-009-9927-6
2. J Psychiatr Res (2009) May;43(8):754-62 doi: 10.1016/j.jpsychires.2008.10.002.
3. Eur J Pharmacol (2009) May 21;610(1-3):99-105 doi: 10.1016/j.ejphar.2009.03.046
4. Fundam Clin Pharmacol (2010) Aug;24(4):445-50 doi: 10.1111/j.1472-8206.2009.00789.x
5. Asian Pac J Cancer Prev (2018) 19(4): 917–922 doi: 10.22034/APJCP.2018.19.4.917

Biotium 提供範圍廣泛的螢光探針用於研究凋亡細胞(Apotosis)

The NucView® Caspase-3 Substrate comes in 3 colors, and measures caspase activity in real time, in live cells. MitoView™ 633 can measure the decrease in mitochondria membrane potential that occurs in early apoptosis. CF® Dye Annexin V conjugates come in many color options, and label PS on the membranes of late apoptotic cells. We also offer kits containing combinations of these probes.