永生化人骨髓間質細胞 | hTERT (Immortalized Human Bone Marrow Mesenchymal Cells – hTERT 貨號T0523
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永生化人骨髓間質細胞- hTERT (Immortalized Human Bone Marrow Mesenchymal Cells – hTERT) | 貨號T0523 細胞數量1×106 cells / 1.0 ml
產品介紹: 骨髓間質細胞（Immortalized Human Bone Marrow Mesenchymal Cells – hTERT, 貨號T0523）。骨髓間質細胞 (Bone Marrow Mesenchymal Cells) 對於原始造血細胞(primitive haematopoietic cells) 的生長和分化(differentiation)以及白血病細胞 (leukaemic cells) 的維持是重要的。通過用MSCV LTR（pCIneo-hEST2-HA）控制下的IRES separate含有hTERT和GFP基因的逆轉錄病毒(retrovirus)感染原代間質細胞來產生永生化細胞。永生化骨髓間質細胞除了支持CD34 +細胞的擴增(expansion)外，還可以支持白血病細胞 (leukaemic cell lines ) 380，REH，OP-1和697的生長。該細胞株不僅可用於支持造血細胞(haematopoietic cells)的生長，還可用於涉及骨髓微環境(bone marrow microenvironment)和調節造血細胞(haematopoiesis)的環境線索的研究。
骨髓間質細胞特點:
- The cells retained inhibition of proliferation by cell-cell contact and did no form foci in soft agar;
- The cells exhibit no karyotypic abnormalities;
- The cells retained identical phenotype to that of their primary counterparts;
- The cells can be induced to differentiate into osteoblasts and chondrocytes.
| Organism | Homo sapiens |
| Source Organ | Bone Marrow |
| BioSafety Level | II |
| Growth Properties | Adherent |
| Morphology | Spindle shaped |
| Recommended Seeding Density | 10,000 – 20,000 cells/cm2; Recommended split ratio is 1:2 to 1:3 |
| Population Doubling | 35-45 hours |
| Immortalization Method | Serial passaging and transduction with recombinant VSV-G retrovirus carrying hTERT and GFP genes |
| Depositor Information | St. Jude Children’s Research Hospital |
| Applications | For research only. The Immortalized Human Bone Marrow Mesenchymal Cells- hTERT is unique because 1. The cells retained inhibition of proliferation by cell-cell contact and did no form foci in soft agar; 2. The cells exhibit no karyotypic abnormalities; 3. The cells retained identical phenotype to that of their primary counterparts; 4. The cells can be induced to differentiate into osteoblasts and chondrocytes. |
| Markers | CD44 and CD73. These cells also express markers of osteoblasts (alkaline phosphatise) and chondrocytes (incorporation of toluidine blue dye) |
骨髓間質細胞（Immortalized Human Bone Marrow Mesenchymal Cells – hTERT, 貨號T0523） | 不杇方法 : Serial passaging and transduction with recombinant VSV-G retrovirus carrying hTERT and GFP genes | 器官來源Bone Marrow | 細胞培養條件: 使用PriCoat™T25培養瓶 (貨號G299)，以最佳化初代和不朽細胞的生長、增殖和擴增。或塗層細胞外基質(Applied Cell Extracellular Matrix) 增強細胞貼附 (貨號G422)。Grow cells in ECM-coated culture vessels with the following conditions. 培養液PriGrowII (貨號 TM002)。為了製備完整的生長培養基，將下列組分添加到基礎培養基中：胎牛血清（TM999）至最終濃度10％，hydrocortisone to 10-6 mol/L，和Penicillin/Streptomycin青黴素/鏈黴素溶液（G255）至最終濃度為1％。二氧化碳（CO2）：5％，溫度：37.0℃。
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Abmgood不朽化系列商品 (immortalized reagenet) Ready-to-use
Abmgood公司於人類與老鼠不朽之細胞株上，具有幾十年的實驗經驗；提供一系列不朽 (immortalized)化之細胞株、及不朽化之試劑商品。ready-to-use定量好之retrovirus、lentiviru、 adenovirus，可直接加於細胞中進行感染表現；病毒液包括有SV40重組病毒、EBV重組病毒、hTERT病毒液、Myc基因病毒液、p53基因病毒液、Rb基因病毒液、Ras基因病毒液。提供106及109兩種包裝力價之病毒液；亦提供一系列病毒力價濃縮與定量試劑商品。
細胞不朽化的工具中，SV40 T antigen是最簡單且最常用來造成不朽化細胞生成的方法。多數的病毒基因和抑癌基因（p53、Rb等）的不活化相關，會誘導細胞處於replicative senescence的階段。目前也有研究顯示被感染的細胞，SV40 T anbtigen會誘導端粒酶（Telomerase）的活性。與端粒（telomere）長度相關的Telomerase Reverse Transcriptase protein (TERT)是一種不朽細胞的研究應用。平常細胞中，hTERT是處於不活化態，必要時會進行活化保持telomere的長度，避免細胞發生replicative senescence的現象。某些細胞hTERT 過度表現（over-expression）對於誘發細胞不朽化是無效的（如初代上皮細胞），反而會造成細胞死亡；同時表現hTERT catalytic subunit以及p53或RB siRNA在人類初代卵巢上皮細胞會造成細胞不朽化。過度表現Ras或Myc T58A mutants也有初代細胞不朽化的現象產生。
Decomplement加熱非活化FBS：
1.讓FBS瓶在4°C下完全解凍過夜。
2.將FBS瓶置於56°C的水浴中30分鐘。
Decomplemented FBS可以在-20°C下長期保存。避免頻繁的凍融循環。每2-3天更換一次完整的媒體。不要讓介質顏色變為黃色。
Thawing細胞解凍方法：(每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式)
1.在37℃水浴中解凍小瓶，直到只有一小塊冰塊。
2.將細胞轉移到含有5ml pre-warmed complete media 之15ml管中。
3.將細胞以290xg離心5分鐘。
4.小心丟棄上清液，不要打擾細胞沉澱，輕輕地上下移液，將細胞重新懸浮在1ml完全培養基中。
5.將細胞培養在150,000-200,000個細胞/ cm2。
Subculture細胞繼代方法: (每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式)
1.當細胞70-90％ confluency時，建議繼代培養。
- Aspirate old media。懸浮液中的一些細胞仍然是活細胞。或者，也可以收集含有懸浮細胞的上清液並離心（Skip to Step 6 in protocol）。
3.加入1：1比例的1X無菌PBS和0.25％胰蛋白酶-EDTA（TM051）。
4.在室溫下孵育細胞3-5分鐘並攪拌培養容器直至90％的細胞脫落。
- 中和胰蛋白酶:添加等量之trypsin + PBS。
6.收集細胞並以290xg離心5分鐘。
7.丟棄上清液，輕輕地上下移液，將細胞重新懸浮在完全培養基中。
8.建議split ratio比不超過1：3。
Freezing細胞凍結：(每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式)
Complete growth medium with decomplemented FBS to a final concentration of 50% from PAN Biotech (P40-37500) or from Nucleus Biologics (FBS1824-001) and 5% DMSO.
儲存溫度：液氮氣相。重要提示：此細胞係對FBS批次非常敏感。我們強烈建議最終用戶使用從PAN biotech或Nucleus Biologics 之FBS。