spCas9 Expressing A549 Cell Line | 貨號T3253
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細胞系列商品 (immortalized cell)
spCas9 Expressing A549 Cell Line | 貨號T3253 細胞數量1×106 cells / 1.0 ml
CRISPR是用於基因組編輯的最通用技術。 abm提供了多種表達Cas9的穩定細胞系 (Cas9 expressing stable cell lines) 。 這些細胞系僅需要從我們的人類，小鼠或大鼠全基因組sgRNA文庫中引入sgRNA (sgRNA載體或病毒) 或轉染體外轉錄的sgRNA。
Features of abm’s Cas9 Expressing Cell Lines:
- Available in popular cell line research models
- Cas9 expression pre-validated by qPCR and/or western blot
- Simplified workflow- only sgRNA is needed
| BioSafety Level | II |
| Organism | Human |
| SourceOrgan | Lung |
| Growth Properties | Adherent |
| Morphology | Epithelial-like |
| Description | A549 cells stably expressing Cas9 |
| Recommended Seeding Density | Thaw entire contents into an appropriate T25 flask as specified in the Propagation instructions. |
| Markers | Puromycin |
| Donor Age | 58 year old |
| Donor Gender | Male |
spCas9 Expressing A549 Cell Line 細胞株 | Lentiviral transduction. | 器官來源Lung | 細胞培養條件: 使用PriCoat™T25培養瓶 (貨號G299) 以最佳化初代和不朽細胞的生長、增殖和擴增。或塗層細胞外基質(Applied Cell Extracellular Matrix) 增強細胞貼附 (貨號G422)。Grow cells in ECM-coated culture vessels with the following conditions. 培養液PriGrowIII (貨號 TM003)。為了製備完整的生長培養基，將下列組分添加到基礎培養基中：胎牛血清（TM999）至最終濃度10％，0.8 µg/ml puromycin (G264)和Penicillin/Streptomycin青黴素/鏈黴素溶液（G255）至最終濃度為1％。二氧化碳（CO2）：5％，溫度：37.0℃。
黴漿菌PCR偵測 | DAPI染核 | 細胞內黴漿菌去除劑 | 水浴槽抑菌劑 | 噴霧式去黴劑 等系列商品
Abmgood不朽化系列商品 (immortalized reagenet) Ready-to-use
Abmgood公司於人類與老鼠不朽之細胞株上，具有幾十年的實驗經驗；提供一系列不朽 (immortalized)化之細胞株、及不朽化之試劑商品。ready-to-use定量好之retrovirus、lentiviru、 adenovirus，可直接加於細胞中進行感染表現；病毒液包括有SV40重組病毒、EBV重組病毒、hTERT病毒液、Myc基因病毒液、p53基因病毒液、Rb基因病毒液、Ras基因病毒液。提供106及109兩種包裝力價之病毒液；亦提供一系列病毒力價濃縮與定量試劑商品。
細胞不朽化的工具中，SV40 T antigen是最簡單且最常用來造成不朽化細胞生成的方法。多數的病毒基因和抑癌基因（p53、Rb等）的不活化相關，會誘導細胞處於replicative senescence的階段。目前也有研究顯示被感染的細胞，SV40 T anbtigen會誘導端粒酶（Telomerase）的活性。與端粒（telomere）長度相關的Telomerase Reverse Transcriptase protein (TERT)是一種不朽細胞的研究應用。平常細胞中，hTERT是處於不活化態，必要時會進行活化保持telomere的長度，避免細胞發生replicative senescence的現象。某些細胞hTERT 過度表現（over-expression）對於誘發細胞不朽化是無效的（如初代上皮細胞），反而會造成細胞死亡；同時表現hTERT catalytic subunit以及p53或RB siRNA在人類初代卵巢上皮細胞會造成細胞不朽化。過度表現Ras或Myc T58A mutants也有初代細胞不朽化的現象產生。
Decomplement加熱非活化FBS：
1.讓FBS瓶在4°C下完全解凍過夜。
2.將FBS瓶置於56°C的水浴中30分鐘。
Decomplemented FBS可以在-20°C下長期保存。避免頻繁的凍融循環。每2-3天更換一次完整的媒體。不要讓介質顏色變為黃色。
Thawing細胞解凍方法：(每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式)
1.在37℃水浴中解凍小瓶，直到只有一小塊冰塊。
2.將細胞轉移到含有5ml pre-warmed complete media 之15ml管中。
3.將細胞以290xg離心5分鐘。
4.小心丟棄上清液，不要打擾細胞沉澱，輕輕地上下移液，將細胞重新懸浮在1ml完全培養基中。
5.將細胞培養在150,000-200,000個細胞/ cm2。
Subculture細胞繼代方法: (每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式)
1.當細胞70-90％ confluency時，建議繼代培養。
- Aspirate old media。懸浮液中的一些細胞仍然是活細胞。或者，也可以收集含有懸浮細胞的上清液並離心（Skip to Step 6 in protocol）。
3.加入1：1比例的1X無菌PBS和0.25％胰蛋白酶-EDTA（TM051）。
4.在室溫下孵育細胞3-5分鐘並攪拌培養容器直至90％的細胞脫落。
- 中和胰蛋白酶:添加等量之trypsin + PBS。
6.收集細胞並以290xg離心5分鐘。
7.丟棄上清液，輕輕地上下移液，將細胞重新懸浮在完全培養基中。
8.建議split ratio比不超過1：3。
可以使用PolyIC（5μg/ ml），CpG（2mM）或LPS（5μg/ ml）進行刺激。這些細胞對FBS的要求特別敏感，因此，建議使用相同的批次培養能夠支持其培養的最佳結果的細胞。我們還建議在完整培養基中添加額外的1％Hepes以促進細胞繁殖。
Freezing細胞凍結：(每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式)
Complete growth medium with decomplemented FBS to a final concentration of 50% from PAN Biotech (P40-37500) or from Nucleus Biologics (FBS1824-001) and 5% DMSO.
儲存溫度：液氮氣相。重要提示：此細胞係對FBS批次非常敏感。我們強烈建議最終用戶使用從PAN biotech或Nucleus Biologics 之FBS。