Abmgood不朽化系列商品 (immortalized cell)

Cas9永生化人小膠質細胞細胞株– SV40 | 貨號T3451  Cas9 Expressing Immortalized Human Microglia -SV40 Cell Line

BioSafety Level	II
Organism	Human
SourceOrgan	Brain
Growth Properties	Adherent
Morphology	Polygonal
Description	Immortalized human microglia stably expressing Cas9
Markers	Neomycin
Freeze-Thaw Recovery	1. Pre-warm complete media in a 37°C waterbath. 2. Remove the cryopreserved vial from the liquid nitrogen storage tank. 3. Thaw the cells quickly by placing the lower half of the vial into the 37°C water bath and remove after 60 seconds. There should still be a few ice crystals left after thawing. It is important not to over-thaw the cryovials as the presence of DMSO is toxic to the cells. 4. Re-suspend the cells in the vial and transfer the cell suspension into a 15mL sterile conical tube containing 5mL complete media. 5. Centrifuge cells at 200x g for 3 minutes to pellet. 6. Aspirate out the media, leaving cell pellet undisturbed. 7. Re-suspend pellet in fresh culture medium and plate in new culture vessel. 8. Incubate cultures at 37°C, 5% CO2.Note: Where applicable, we recommend selection drug addition after cells recovered from thawing. Directly adding selection drug while thawing could lead to stressed cells and lower viability.
Propagation	Use of PriCoat™ T25 Flasks (G299) or Applied Cell Extracellular Matrix (G422) is required for cell adhesion to the culture vessels. Grow cells in ECM-coated culture vessels with the following conditions. The base medium for this cell line is Prigrow III medium available at abm, Cat. No. TM003. To make the completed growth medium, add the following components to the base medium with the final concentration: fetal bovine serum (TM999) to a final concentration of 10%, and Penicillin/Streptomycin Solution (G255) to a final concentration of 1%. Carbon dioxide (CO2): 5%, Temperature: 37.0°C.
Shipping	Dry Ice
Quality Control	1) Neomycin drug selection 2) Western Blot analysis for Cas9 transgene expression

Cas9永生化人小膠質細胞細胞株- SV40細胞特性: Adherent | 不杇方法: Immortalized human microglia stably expressing Cas9 | 來源Huamn Brain 。Markers Neomycin。細胞培養條件: 使用PriCoat™T25培養瓶 (貨號G299)以最佳化初代和不朽細胞的生長、增殖和擴增。或塗層細胞外基質(Applied Cell Extracellular Matrix) 增強細胞貼附 (貨號G422)。Grow cells in ECM-coated culture vessels with the following conditions. 培養液PriGrowIII (貨號 TM003)。為了製備完整的生長培養基，將下列組分添加到基礎培養基中：胎牛血清（TM999）至最終濃度10％，和Penicillin/Streptomycin青黴素/鏈黴素溶液（G255）至最終濃度為1％。於二氧化碳（CO2）：5％，溫度：37.0℃培養。

Decomplement加熱非活化FBS：

1.讓FBS瓶在4°C下完全解凍過夜。

2.將FBS瓶置於56°C的水浴中30分鐘。

Decomplemented FBS可以在-20°C下長期保存。避免頻繁的凍融循環。每2-3天更換一次完整的媒體。不要讓介質顏色變為黃色。

Thawing細胞解凍方法：(每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式)

1.在37℃水浴中解凍小瓶，直到只有一小塊冰塊。

2.將細胞轉移到含有5ml pre-warmed complete media 之15ml管中。

3.將細胞以290xg離心5分鐘。

4.小心丟棄上清液，不要打擾細胞沉澱，輕輕地上下移液，將細胞重新懸浮在1ml完全培養基中。

5.將細胞培養在150,000-200,000個細胞/ cm2。

Subculture細胞繼代方法: (每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式)

1.當細胞70-90％ confluency時，建議繼代培養。

2. Aspirate old media。懸浮液中的一些細胞仍然是活細胞。或者，也可以收集含有懸浮細胞的上清液並離心（Skip to Step 6 in protocol）。

3.加入1：1比例的1X無菌PBS和0.25％胰蛋白酶-EDTA（TM051）。

4.在室溫下孵育細胞3-5分鐘並攪拌培養容器直至90％的細胞脫落。

5. 中和胰蛋白酶:添加等量之trypsin + PBS。

6.收集細胞並以290xg離心5分鐘。

7.丟棄上清液，輕輕地上下移液，將細胞重新懸浮在完全培養基中。

8.建議split ratio比不超過1：3。

可以使用PolyIC（5μg/ ml），CpG（2mM）或LPS（5μg/ ml）進行刺激。這些細胞對FBS的要求特別敏感，因此，建議使用相同的批次培養能夠支持其培養的最佳結果的細胞。我們還建議在完整培養基中添加額外的1％Hepes以促進細胞繁殖。

Freezing細胞凍結：(每種細胞建議條件可能有許不同，依照原廠建議操作，以下為通用方式)

Complete growth medium with decomplemented FBS to a final concentration of 50% from PAN Biotech (P40-37500) or from Nucleus Biologics (FBS1824-001) and 5% DMSO.

儲存溫度：液氮氣相。重要提示：此細胞係對FBS批次非常敏感。我們強烈建議最終用戶使用從PAN biotech或Nucleus Biologics 之FBS。

產品資料請按這PriCoat™ T25 Flasks | type I collagen coating | I 型膠原(type I collagen) | Applied Cell Extracellular Matrix | Prigrow III Medium初代細胞培養液

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Abmgood不朽化系列商品 (immortalized reagenet) Ready-to-use

Abmgood公司於人類與老鼠不朽之細胞株上，具有幾十年的實驗經驗；提供一系列不朽 (immortalized)化之細胞株、及不朽化之試劑商品。ready-to-use定量好之retrovirus、lentiviru、 adenovirus，可直接加於細胞中進行感染表現；病毒液包括有SV40重組病毒、EBV重組病毒、hTERT病毒液、Myc基因病毒液、p53基因病毒液、Rb基因病毒液、Ras基因病毒液。提供106及109兩種包裝力價之病毒液；亦提供一系列病毒力價濃縮與定量試劑商品。

細胞不朽化的工具中，SV40 T antigen是最簡單且最常用來造成不朽化細胞生成的方法。多數的病毒基因和抑癌基因（p53、Rb等）的不活化相關，會誘導細胞處於replicative senescence的階段。目前也有研究顯示被感染的細胞，SV40 T anbtigen會誘導端粒酶（Telomerase）的活性。與端粒（telomere）長度相關的Telomerase Reverse Transcriptase protein (TERT)是一種不朽細胞的研究應用。平常細胞中，hTERT是處於不活化態，必要時會進行活化保持telomere的長度，避免細胞發生replicative senescence的現象。某些細胞hTERT 過度表現（over-expression）對於誘發細胞不朽化是無效的（如初代上皮細胞），反而會造成細胞死亡；同時表現hTERT catalytic subunit以及p53或RB siRNA在人類初代卵巢上皮細胞會造成細胞不朽化。過度表現Ras或Myc T58A mutants也有初代細胞不朽化的現象產生。