【膠原蛋白&水解產物羥脯氨酸檢測】Collagen& Hydroxyproline Assay KITS-Abcam (Biovision)
【 膠原蛋白&水解產物羥脯氨酸檢測】 Collagen& Hydroxyproline Assay KITS – Abcam (Biovision)
不含高氯酸鹽新上市
Collagen膠原蛋白是哺乳動物中含量最豐富的蛋白質，佔體內蛋白質含量的近30％。膠原蛋白是在 skin皮膚， tendons肌腱， bone骨，cartilage軟骨，ligaments 韌帶和muscles肌肉等組織中發現的細胞外scaffolding protein支架蛋白。有超過20種不同的特徵類型的膠原蛋白，但是fibrilous types 纖維類型I，II和III佔哺乳動物總膠原的90％以上。膠原蛋白具有triple helical structure三螺旋結構，由三個具有重複Gly-X-Hyp三肽序列的’preprocollagen前原膠原’鏈組成，其中X是任何氨基酸，Hyp是羥脯氨酸，翻譯後修飾的氨基酸由脯氨酸通過脯氨酰-4-羥化酶。在動物中，hydroxyproline羥脯氨酸幾乎全部存在於膠原蛋白（其質量含有大約12-14％的hydroxyproline羥脯氨酸）並且有助於其結構剛性和高拉伸強度。hydroxyproline羥脯氨酸是組織中存在的膠原量的直接測量指標。據信許多疾病影響膠原蛋白的 turnover，包括tumor invasion 腫瘤侵襲和 metastasis轉移，rheumatoid arthritis類風濕性關節炎，cardiopulmonary fibrosis心肺纖維化和 muscular dystrophy. 欲萃取到較純的膠原蛋白，常見方式有化學處理法、酵素處理法、微生物處 理法。BIOVIOSION提供一系列 膠原蛋白 (貨號K218-100) 及羥脯氨酸含量檢測套組 (貨號K555-100) ，另提供不含高氯酸鹽 之膠原蛋白 (貨號K406-100 及羥脯氨酸含量檢測套組 (貨號K226-100) 。
Total Collagen Assay Kit (Perchlorate-Free)
BioVision的Total Collagen Assay Kit II（不含高氯酸鹽）是一種用於檢測各種生物樣品中少量膠原蛋白的快捷方便程序。該測定基於樣品的水解以產生游離的Hyp，其被氧化並反應以產生在560nm處具有吸收峰的亮色髮色團。該檢測方法採用專有的酸性顯影液，無需使用有害的高氯酸即可精確測量水解液中的膠原蛋白，無需任何特殊處理和廢物處理方案。該測定法可以檢測96孔格式中每孔最少0.5μg膠原蛋白，並產生與經典的基於高氯酸的方法實際上相同的比色結果。
| Cat # +Size | K406-100 |
| Size | 100 Reactions |
| Kit Summary | • Detection method- Absorbance (OD = 560 nm). • Sample Types- Mammalian tissues, protein/peptide hydrolysates, serum, Urine • Applications- Measurement of collagen in various sample types. |
| Detection Method | Detection method- Absorbance (OD = 560 nm). |
| Species Reactivity | Mammalian tissues, protein/peptide hydrolysates, serum, urine |
| Applications | Measurement of collagen in various sample types. |
| Features & Benefits | • Simple, fast and convenient assay • Can detect as low as 0.5 µg of collagen in a variety of samples • Simple procedure; takes less than ~60 minutes • Faster than Perchlorate-Based Assay • PCA-free |
| Kit Components | • Oxidation Buffer • Chloramine T Concentrate • Developer Solution • DMAB Concentrate (in DMSO) • Collagen I Standard (3 mg/ml) • Microplate Sealing Film |
總膠原蛋白分析套組Total Collagen Assay Kit | 貨號K218-100
A simple, sensitive & easy colorimetric assay to quantitate total collagen levels.
產品規格: Total Collagen Assay Kit總膠原蛋白分析套組 貨號K218-100 | 100個分析 產品描述: 總膠原蛋白分析套組，吸收光Absorbance (560 nm)偵測；可用於哺乳動物組織培養液、protein/peptide hydrolysates、serum、尿液之樣品。測量最低靈敏度0.5ug的膠原。
Applications:
- Non-radioactive, homogeneous assays
- Specific, sensitive assays
- Convenient: minimal sample preparation; fast protocols
- Cost effective: 100 assays; High Throughput Screening compatible
- Validated: using mammalian tissues, biological fluids
產品描述：
Collagen膠原蛋白，豐富存在細胞外基質和結締組織中，是不溶性蛋白質。亦存在皮膚、腱、骨、軟骨、肌肉、玻璃體液和韌帶以及其他組織中。存在超過十六種類型的膠原；type I，II和III型膠原在哺乳動物中包含超過80％的含量。膠原的三螺旋結構是相當獨特的：它由基本三聚體的重複模式：甘氨酸 – 脯氨酸 – 羥脯氨酸。在細胞中，膠原作為前膠原分泌並且這些鏈被轉運到內質網中，其中許多轉譯後修飾具有二硫鍵的三螺旋的形成。膠原的過度產生與包括肝硬化、肺纖維化、和腫瘤生長的病理狀況相關。 BioVision的膠原蛋白檢測試劑盒是一種簡單靈敏的檢測方法，可檢測各種樣品中的少量膠原蛋白。該測定基於樣品的酸水解以形成水解產物和羥脯氨酸。該釋放的羥脯氨酸被氧化形成反應中間體，以（Abs 560nm）。該測定對膠原是簡單，敏感和特異的，並且可以在多種樣品例如組織勻漿，生物流體和純化蛋白中檢測低至0.5μg的膠原蛋白。
Hydroxyproline Colorimetric Assay Kit羥脯氨酸呈色分析套組
產品規格: 羥脯氨酸呈色分析套組 貨號K555 | 100個分析
產品描述: Hydroxyproline (4-hydroxyproline) 羥脯氨酸（4-羥基脯氨酸）是常見的非蛋白生成氨基酸。它僅存在於哺乳動物的膠原和彈性蛋白中，但存在於植物中的許多其它蛋白質中。羥脯氨酸僅存在翻譯後修飾肽鏈中，脯氨酸羥化酶非游離的羥基化脯氨酸。組織水解產物中的Hydroxyproline羥脯氨酸，為測量collagen膠原或gelatin明膠量的指標。多種疾病狀態影響膠原蛋白轉變，並可導致血清或尿羥脯氨酸升高。這種病症的範圍從腫瘤、炎症、腎或骨疾病到內分泌和自身免疫性疾病。 BioVision的羥脯氨酸測定試劑盒K555-100，設計用於測量組織或蛋白/肽水解產物中的羥脯氨酸。它可用於測量來自其他生物樣品如血清或尿液的羥脯氨酸（如果它們已經經歷了之前的純化過程）;方法容易、方便，在560nm處具有最大吸光度的色原體，該測定範圍0.1-2μg。
| Size | 100 assays |
| SKU+Size | K555-100 |
| Detection Method | Absorbance (560 nm) |
| Species Reactivity | Mammalian |
| Applications | The assay is useful over the range of 0.1-2 μg. |
| Features & Benefits | • Simple procedure; takes less than ~100 minutes • Convenient and easy to use |
| Kit Components | • Oxidation Buffer • Chloramine T Concentrate • Perchloric acid/Isopropanol Solution • DMAB Concentrate (in DMSO) • Hydroxyproline Standard (1 mg/ml) |
Hydroxyproline羥脯氨酸 | 貨號K226-100 （不含高氯酸鹽）
This kit does not use PCA to detect and quantify Hydroxyproline
產品描述：Hydroxyproline羥脯氨酸（（2S，4R）-4-羥基脯氨酸，Hyp）是由脯氨酰-4-羥化酶形成的nonproteinogenic amino acid非蛋白原氨基酸，蛋白質合成後催化多肽脯氨酸殘基的後轉譯修飾。在動物中，hydroxyproline羥脯氨酸幾乎全部存在於膠原蛋白中，其含有約12-14％的羥脯氨酸（原纖維蛋白彈性蛋白還含有少量的羥脯氨酸）。因此，組織水解產物中的羥脯氨酸為直接測量膠原蛋白量含量。膠原蛋白是哺乳動物中最豐富的蛋白質，許多疾病被認為會影響膠原蛋白的轉換collagen turnover，包括tumor invasion腫瘤侵襲和metastasis轉移，rheumatoid arthritis類風濕性關節炎，Cardiopulmonary fibrosis心肺纖維化和muscular dystrophy肌營養不良。測量Hydroxyproline的傳統方法基於Hydroxyproline氧化成pyrrole intermediate吡咯中間體，然後與溶解在濃高氯酸（HClO4）中的Ehrlich試劑反應。Perchloric acid高氯酸是一種有毒物質，具有毒性和高反應性，需要特殊處理和廢物處理協議。 BioVision的Hydroxyproline Assay Kit II（不含高氯酸鹽）使用專有的酸性顯影劑溶液，無需使用有害的高氯酸鹽即可準確測量組織和蛋白質/肽酶水解產物中的Hydroxyprolin。這是一種快速方便的方案，產生顏色鮮豔的髮色團，在560 nm處具有吸收峰。該測定法可以在96孔格式中檢測每孔最少0.05μg羥脯氨酸，並產生與傳統的高氯酸基方法幾乎相同的比色結果。
| Cat # +Size | K226-100 |
| Size | 100 Reactions |
| Kit Summary | • Detection method- Absorbance (560 nm) • Species reactivity- Mammalian • Applications- The assay is useful over the range of 0.1-1 μg. |
| Detection Method | Absorbance (OD = 560 nm). |
| Species Reactivity | Mammalian |
| Applications | Estimation of hydroxyproline concentration in various biological samples |
| Features & Benefits | • Simple procedure; takes less than ~60 minutes • Convenient and easy to use • Faster than Perchlorate-Based Assay • PCA-free |
| Kit Components | • Oxidation Buffer • Chloramine T Concentrate • Developer Solution • DMAB Concentrate (in DMSO) • Hydroxyproline Standard (1 mg/ml) • Microplate Sealing Film |
產品問與答尿液樣品的純化
100μl血清/尿中，加入100μl濃鹽酸。 HCl在壓力密封的特氟隆蓋瓶中並在120℃水解3小時。加入5mg活性炭Norit或活性炭Darco（Sigma Cat＃97876或242276）混合。以12000g離心2分鐘。將10ul上清液轉移至96孔板中，在真空下蒸發至乾。繼續操作手冊步驟3。
產品問與答樣品處理與保存
樣品用酸消化/水解以從膠原計算羥脯氨酸。標準品是羥丙基甲基纖維素，因此不需要HCL /蒸煮處理。此外，標準品不是真空乾燥的，因為其不含HCl-在進行其它試劑之前，將樣品乾燥以除去HCl。手冊中，要在真空下乾燥板。若沒這方面設備，可以在60℃的烤箱中乾燥板，確保擺脫HCl。空氣乾燥需要很長時間，不推薦。持水解的裂解物或乾燥的96孔板在-80攝氏度，供以後使用。請將裂解物等分，並在儲存前密封板。樣品製備部分中的反應時間，120.C進行少於3小時，否則水解將不能有效完成。可以將水解O / N繼續第二天，或水解3小時並凍結水解sup 於-80℃，以備使用。細胞若燒焦的外觀不影響實驗。預期當細胞/組織受到高溫處理3小時時，它們會產生燒焦的外觀。在進行下一步之前，讓這種黑色物質作為碎屑沉澱（如果需要，給管子輕輕旋轉）。然後僅取上清液用於下一步蒸發。
試劑盒可以用於像細菌，植物，果蠅，酵母等樣品；K555羥脯氨酸呈色分析套組，優化與哺乳動物樣品的試劑盒。然而，理論上這些試劑盒應與來自多個物種/來源的樣品一起使用。由於最佳條件取決於樣品類型，因此必須調整方案以適應樣品以獲得有效的結果。新鮮樣品總是優於冷凍樣品。然而，也可以使用冷凍樣品，條件是它們在分離後立即冷凍，不是多次冷凍解凍（為此我們建議在冷凍前, 分裝多管使用)。
| Fluorometric | Traditional Method | PCA-Free Method | |
| Detection | RFU (376/468 nm) | OD (560 nm) | OD (560 nm) |
| Hydroxyproline | N/A | K555 | K226 |
| Total Collagen | N/A | K218 | K406 |
| Soluble Collagen | K532 | N/A | N/A |
| Hydroxyproline | Total Collagen | Soluble Collagen | |||
| K555 | K226 | K216 | K406 | K532 | |
| Range (µg) | 0.1-1 | 0.1-1 | 0.5-10 | 0.5-10 | 0.2 – 2 |
| Fluorometric | (Classic Method) | (PCA-Free) | |
| Perchloric Acid | Not applicable | Yes | No |
| Hydrolysis (pH) | Acidic (Acetic Acid) | Acid (HCl) | Alkaline (NaOH) |
| Hydrolysis time (h) | 8 | 3 | 1 |
| Reaction Temperature (ºC) | 37 | 60 | 60 |
| Reaction time (min) | 80 | 90 | 45 |