<<黴漿菌Mycoplasma污染檢測>>細胞實驗中如何定期偵測黴漿菌汙染
黴漿菌偵測 Mycoplasma PCR kit-ABMGOOD
細胞實驗中，不可忽略”黴漿菌Mycoplasma”污染的問題。黴漿菌污染，影響細胞增殖、代謝反應、基因合成及過程、甚至細胞貼附特性。因此，定期細胞黴漿菌Mycoplasma偵測，為培養細胞例行性之工作。實驗室引入細胞株，也需建立黴漿菌檢測的平台。黴漿菌(Mycoplasma)是一種能自我複製的最小原核微生物，和其他細菌不同是-黴漿菌(Mycoplasma) 沒有細胞壁，細胞形態不固定有多種變化，且可以在培養基上形成極小的菌落。許多常見的抗生素(antibiotic)，如盤尼西林或β－內醯胺類抗生素對黴漿菌(Mycoplasma)是無效的，難以清除污染。感染的細胞不會呈現死亡或其他可辨別的現象。因此在進行細胞培養時，定期偵測黴漿菌汙染是必須執行的例行性工作之一。
難以發現的黴漿菌污染
黴漿菌(Mycoplasma)是細胞培養常見且棘手的汙染問題之一，發生率高且不易肉眼發覺。感染的細胞不會呈現死亡或其他可辨別的現象，但卻會影響細胞增殖(proliferation)、代謝反應(metabolism)、基因合成(gene synthesis)及過程(processing)、甚至細胞貼附(adhesion properties)特性。因此在進行細胞培養時，定期監控黴漿菌汙染是必須執行的例行性工作之一
abm’s 黴漿菌快速PCR偵測套組(貨號 G238）可在不到 2 小時的時間內對 200種以上+ (Mycoplasma species )進行高度特異性和靈敏的檢測 。該暢銷試劑盒旨在最大限度地減少假陽性，確保快速可靠地進行細胞培養物的常規篩查。國家公共衛生機構最近的一份官方出版物發現，ABMGOOD試劑盒性能優於 Sigma 和 Lonza 的試劑盒，同時比 ATCC 的試劑盒價格更優惠（Russell 等，2020）。<黴漿菌物種(mycoplasma-species)/菌株資料查閱請按此>
黴漿菌PCR偵測原理
利用具專一性之primers，經由PCR反應來複製mycoplasma DNA。ABMGOOD提供之Mycoplasma 黴漿菌偵測套組，不須經由DNA純化，可直接使用培養液進行PCR偵測。免去DNA純化步驟，可於二小時以內完成實驗，達到快速篩檢的目的。
- 無需 DNA 分離 (No DNA isolation needed) ：直接將細胞培養上清液加入 PCR 反應中
- 快速而全面(Rapid and Comprehensive)：在不到 2 小時內檢測黴漿菌(Mycoplasma species )
- 高度敏感和特異(Highly Sensitive and Specific)：與競爭試劑盒相比，顯示出最高的真陽性率和最低的假陽性率
- 易於使用(Easy-to-use)：包括即用型引物混合物和陽性對照
- 與競爭試劑盒相比，每個樣品的成本降低 6 倍（Russel 等人，2020 年）
- 優於 Sigma 和 Lonza 的試劑盒（Russel 等人，2020 年）
黴漿菌污染–影響細胞正常實驗
1. 黴漿菌污染，抑制細胞增殖與代謝反應
2. 影響病毒增殖或病毒感染之效率
3. 降低細胞轉染之效率
4. 改變基因表現型態
黴漿菌PCR偵測kit產品提供 (產品貨號#G238)
| PRODUCT COMPONENTS | QUANTITY |
|---|---|
| BlasTaq™ 2X PCR MasterMix |
1.25 ml
|
| Primer Mix |
100 μl
|
| Positive Control |
250 μl
|
| Nuclease-Free H2O |
1.0 ml
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黴漿菌PCR偵測kit引用文獻30+
細胞準備: 細胞如正常方法繼代 ( 48-72 hours )至八成滿條件，取2.5ul的細胞上清液 (無需細胞本身)，進行以下PCR反應。PCR反應液置於冰上混合配製如下(反應體積25ul)
輕輕混合反應物並短暫離心。PCR(聚合酶連鎖反應)設定條件如下(30-40cycles)
PCR 後，將反應維持在 4°C 或儲存在 -20°C 直至使用。 通過瓊脂糖凝膠電泳分析擴增產物。溴化乙錠或 SafeView™（貨號 G108/G108-G）染色觀察。
PCR 產物長度約為 500 bp，表明測試的細胞培養物受到支原體污染。根據黴漿菌(Mycoplasma)菌株的不同，PCR 產物的長度將在 370-550 bp 之間變化。<黴漿菌物種(mycoplasma-species)/菌株資料查閱請按此> 在進行PCR 之前，將反應混合物置於冰上，反應混合物準備好後立即開始PCR。<原廠操作手冊下載請按此>
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