【玻尿酸檢測 (Purple-Jelley) 】Hyaluronic acid Assay, Biocolor 貨號H2000/H1000
玻尿酸檢測 (Purple-Jelley) | Hyaluronic acid Assay 貨號H2000 (400 assays)/H1000 (100 assays)
透明質酸(Hyaluronic acid)的水合分子是一種溫和的碳水化合物聚合物(carbohydrate polymer)的巨分子。這是由長而柔韌的非分枝(non-branching chain )由重複的二糖形成的鏈圖案。二糖由以下成分組成：替代醣醛酸(alternative uronic acid)和氨基糖單位(aminosugar units)。在人類臍帶( umbilical cord)和滑膜中液體中，HA 的大小據報導約為3,000,000 Da。為動物組織研究工作而設計的檢測方法, 此檢測方法不適用於血液和尿液分析。
玻尿酸 (Hyaluronic Acid) : A gentle giant!
透明質酸(Hyaluronic acid)在其水合形式下是一種獨特的多醣聚合物(polysaccharide polymer)，通常被稱為“溫柔的巨人”。它存在於許多組織中，特別是軟骨和滑液中，由具有重複二糖模式的長而靈活、無分支的鏈組成。此模式由交替的醣醛酸(uronic acid )和氨基糖單元(aminosugar units) 組成。透明質酸 (Hyaluronic acid) 具有多種作用，包括組織補水(tissue hydration )和潤滑(lubrication)、細胞訊號傳導(cell signalling)、細胞外基質重組(extracellular matrix reorganisation)和傷口修復(wound repair)。透明質酸參與組織潤滑(tissue lubrication)和傷口癒合(wound healing)，這意味著它已成為醫療( medical )和美容護膚治療(cosmetic skincare treatments)以及骨關節炎(osteoarthritis)治療的知名添加劑。因此，測定或測量透明質酸的能力引起了各學科科學研究人員的興趣。
Why is our kit called ‘Purple-Jelley’?
發現菁染料中的 J-聚集體效應(J-Aggregate Effect ), 1936 年，Edwin Jelley 做出了一個令人著迷的觀察，並在一封致《自然》雜誌的信中記錄了它（《自然》138，1009 – 1010）。他注意到某些菁染料具有一種特殊行為，當溶解在 5 M NaCl 中時，這些染料在較長的波長（約 650nm）處顯示出第三個吸收峰。然而，在去離子水中，它們僅在約 540nm 和 570nm 處顯示雙峰。濃縮染料溶液中的 650nm 峰是由染料分子聚集而成，後來被稱為“J 聚集體 (J-aggregate) ”，以紀念 Edwin Jelley。 J 聚集體是一種超分子複合物，由單一染料分子堆疊而成。20 世紀 60 年代後續研究，尤其是 Kay 等人的研究。 （J. Physical Chem. 68, 1896 – 1906）表明，各種生物聚合物，包括蛋白質、DNA、極性脂質和糖胺聚醣，也能誘導第三個吸收峰。這一現象導致了紫色果凍分析法的出現，該分析法以染料試劑的紫色和埃德溫·傑利本人的名字命名。
An overview of the Purple-Jelley assay steps:
Purple-Jelley 檢測步驟概述：在測定過程中，透明質酸(hyaluronic acid) 在測定樣品製備過程中被選擇性純化。然後將其與 Purple-Jelley 染料試劑反應，並記錄特徵第三波長的吸收率。透過與校準曲線進行比較，可以測量樣品的透明質酸(hyaluronic acid)含量。
步驟1.檢測方案包括對組織樣本進行連續樣品製備，包括酶促蛋白消化(enzymatic protein digestion)，然後是GAG的沉澱和純化，最終沉澱出純化的透明質酸。
步驟2。然後將處理過的樣品與 Purple-Jelley 染料試劑一起孵育 10 分鐘，形成可以透過分光光度法測量的有色產物。
步驟3. 透過與使用包含透明質酸的標準品（隨試劑盒提供）製備的校正曲線進行比較，可以計算出未知樣品的透明質酸含量。
Assay range
Limit of Detection
Detection Method
Measurements per kit
Suitable Samples
In-vivo: Hyaluronic acid purified from in-vivo tissues. The kit protocol involves extraction and purification of hyaluronic acid prior to reaction with the Purple-Dye reagent.
Precautions
This kit is designed for research use only. Not for use in diagnostic procedures.
Kit requires access to a centrifuge, as well as a spectrophotometer/colorimeter capable of colorimetric, absorbance detection at 655nm.
Specific sample preparation protocols may require customer to provide further reagents, consult assay manual for further information.
透明質酸(Hyaluronic acid)在組織中的分佈, 表 1 列出了本檢測程序中產生的 HA 在組織中的分佈情況並且僅作為概要指南提供。在成年動物中，透明質酸(Hyaluronic acid)百分比隨著年齡增長而逐漸增加，因為肌肉和脂肪質量減少。
單一染料分子可能形成堆疊形式以產生超分子複合物，如圖 3 所示。20 世紀 60 年代 Kay 等人進行了進一步研究。 （物理化學雜誌 68，1896-1906）發現了許多生物聚合物，包括蛋白質、DNA、極性脂質和當使用高染料濃度時，醣胺聚醣可能會誘導第三個峰值。1969 年，Dhlberg、Dingman 和 Peacock 將這種染料重新命名為“Stains-all”（J. Mol. Biol. 41, 139）。紅線光譜：僅 HA (2 μg)
藍色線譜：僅含 4-硫酸軟骨素 (2 μg)。綠線光譜：等量的 HA 和 4-硫酸軟骨素。灰色線譜：HA 加上兩倍濃度的 4-硫酸軟骨素。
https://www.zotero.org/groups/5511828/biocolorassays-publications/collections/6WGFRBY4