硝酸鹽/亞硝酸鹽比色測定試劑盒| Nitrate/Nitrite Colorimetric Assay Kit 貨號Abnova™ KA1342

Nitrate/Nitrite Colorimetric Assay Kit, 96 assays

一氧化氮 (NO) 在生物系統中由一氧化氮合酶 (NOS) 合成。一氧化氮合酶是一個非常複雜的酶，作用於分子氧、精氨酸和 NADPH，產生 NO、瓜氨酸、和 NADP+。這個過程需要五個額外的輔助因子（FMN、FAD、血紅素、鈣調蛋白和四氫生物蝶呤）和兩種二價陽離子（鈣和血紅素鐵；見圖 1）。三種不同的亞型NOS 已被識別，如圖 2 所示。

NO 由神經元、內皮細胞、血小板和中性粒細胞響應於穩態刺激。1,2 這種 NO 被快速清除（t1/2 = 4 秒）並以旁分泌方式起作用轉導細胞信號。 NO 與鳥苷酸環化酶的血紅素輔基相互作用，激活
酶並導致 cGMP 水平升高。 NO 也由其他細胞（巨噬細胞、成纖維細胞、肝細胞）以微摩爾濃度響應炎症或有絲分裂刺激。在這種情況下，生物學作用是通過氧化毒性防禦非自身病原體。這些非常高的一氧化氮水平導致過氧亞硝酸鹽的形成、鐵硫簇的破壞、硫醇亞硝化和蛋白質的硝化酪氨酸殘基。因此，不同生物系統中產生的 NO 量可能有幾個數量級的差異其程度及其隨後的化學反應性是多種多樣的。NO在體內的最終產物是亞硝酸鹽（NO2-）和硝酸鹽（NO3-）。 NO2相對比例- 和NO3-是是可變的，無法確定地預測。因此，總 NO 產生量的最佳指標是兩者之和 (二氧化氮- 和NO3)

測定原理 (Principle of the Assay)

硝酸鹽/亞硝酸鹽比色測定試劑盒(Nitrate/Nitrite Colorimetric Assay Kit )提供了一種準確、方便的方法來測量總硝酸鹽( total nitrate/nitrite)通過簡單的兩步過程即可測量硝酸鹽/亞硝酸鹽濃度(nitrate/nitrite concentration)。第一步是利用硝酸還原酶將硝酸鹽(nitrate)轉化為亞硝酸鹽(nitrite)。第二步是添加 Griess 試劑，將亞硝酸鹽(nitrite)轉化為深紫色偶氮化合物（見圖 3）。該偶氮化合物吸光度的光度測量髮色團準確測定 NO2- 專注。NADPH 是 NOS 酶功能的重要輔助因子。不幸的是，NADPH 會干擾Griess 試劑的化學原理，Griess 試劑是亞硝酸鹽檢測最常用的試劑。一種方法是防止這種干擾的方法是使用少量的 NADPH 與催化系統結合進行回收將 NADP+ 轉化為 NADPH。這是硝酸鹽/亞硝酸鹽比色測定試劑盒(Nitrate/Nitrite Colorimetric Assay Kit )中使用的系統。效果很好用於分析血漿和尿液等液體中的硝酸鹽(nitrate)和亞硝酸鹽(nitrite)，也可提供高靈敏度的用於檢測低水平亞硝酸鹽(nitrite)的螢光版本。但它不能用於分析硝酸鹽(nitrate)和體外 NOS 測定中添加了過量 NADPH 的亞硝酸鹽(nitrite)。對於這些測定，需要進行第二次方法（LDH 方法）用於 96 孔板形式。

Figure 6. Spike and recovery of Nitrate in human plasma (EDTA), saliva, and urine. Human plasma, urine,
and saliva were spiked with different amounts of nitrate, processed as described in the Sample Preparation
section, serially diluted with Nitrate/Nitrite Assay Buffer (1X), and evaluated using the Nitrate/ Nitrite
Colorimetric Assay Kit. The error bars represent standard deviations obtained from multiple dilutions of each
sample.